【摘 要】
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噬菌体裂解酶可以特异、高效的裂解细菌,有着与抗生素完全不同的作用机制,是极具潜力的新概念抗菌物质.在前期,本课题组在医源污水中筛选到1株具有独特遗传特性的噬菌体GH15,并通过基因工程获得了该噬菌体的裂解酶(LysGH 15).LysGH 15在体外和体内均对金黄色葡萄球菌表现出广谱、高效的裂解活性,显示出了很大的研究与应用潜力.LysGH 15能否引起金葡菌产生抗性？在体内能否刺激机体产生抗体,
【出 处】
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2016第六届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会第五届全国会员代表大会暨2016学术年会、中国微生物学会兽医微
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噬菌体裂解酶可以特异、高效的裂解细菌,有着与抗生素完全不同的作用机制,是极具潜力的新概念抗菌物质.在前期,本课题组在医源污水中筛选到1株具有独特遗传特性的噬菌体GH15,并通过基因工程获得了该噬菌体的裂解酶(LysGH 15).LysGH 15在体外和体内均对金黄色葡萄球菌表现出广谱、高效的裂解活性,显示出了很大的研究与应用潜力.LysGH 15能否引起金葡菌产生抗性？在体内能否刺激机体产生抗体,抗体是否影响LysGH 15的治疗作用？为了回答这些科学问题,我们开展了相关的研究.本研究将不同浓度裂解酶连续的与金黄色葡萄球菌作用,通过体外平板裂解实验以及对不同代次裂解酶MIC的检测,经过8轮筛选,均未发现耐药菌株的产生,表明LysGH15不会诱导金黄色葡萄球菌产生针对自身的抗性.本研究进一步对LysGH 15的抗原性进行了研究,发现一次皮下免疫50μg LysGH 15,在第3周抗体效价达到最高,且免疫球蛋白主要为IgG.体外裂解酶与其刺激机体产生的抗体相互作用实验表明,当LysGH 15与其抗体长时间作用后依然不影响其抗菌活性,免疫荧光的实验结果进一步证实LysGH 15的抗体并未影响其结合细菌的能力.进一步的体内实验表明,当机体产生了针对LysGH 15的特异性抗体后,50μg的裂解酶LysGH 15依然可以有效的治疗处于菌血症状态的小鼠.通过对小鼠血液含菌量检测,未保护组小鼠在攻菌后血液中的菌落数在6h之内大于108 CFU/mL；而LysGH 15治疗组的小鼠血液中的菌落数在同样时间内则小于104 CFU/mL.同时,该裂解酶还可以缓解因金葡菌感染而使小鼠产生的炎性因子的水平.这些实验表明裂解酶LysGH 15所产生的抗体在体外和体内均不会影响该酶对金黄色葡萄球菌的抗菌活性.急性毒性试验表明,大剂量(10mg/只)注射裂解酶也未对机体产生明显的毒副作用,证明了LysGH 15使用的安全性.以上研究表明LysGH15很有潜力作为治疗药物进行体内应用,为LysGH 15的后续应用提供了奠定了坚实的基础.
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