【摘 要】
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原核表达小鼠Flt3配体,分析其在不同亚型DCs体外诱导中的应用潜能,为不同亚型DCs的深入研究奠定基础。方法PCR扩增flt31基因,构建pCold-flt31质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达并纯化。重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析,并用于小鼠骨髓源DCs的诱导制备,流式细胞术分析不同DC亚型相关分子标志以及CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ的表达,同
【机 构】
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扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州,225009
【出 处】
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2016第六届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会第五届全国会员代表大会暨2016学术年会、中国微生物学会兽医微
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原核表达小鼠Flt3配体,分析其在不同亚型DCs体外诱导中的应用潜能,为不同亚型DCs的深入研究奠定基础。方法PCR扩增flt31基因,构建pCold-flt31质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达并纯化。重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析,并用于小鼠骨髓源DCs的诱导制备,流式细胞术分析不同DC亚型相关分子标志以及CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ的表达,同时ELISA测定IL-12和IFN-α的表达。结果SDS-PAGE和Western blot结果表明目的蛋白成功表达和纯化,该蛋白能诱导小鼠骨髓细胞分化为较高比例 (约60％) 的DCs, 且包含cDCs (CD11c+CD45RA-) 和pDCs(CD1 1c+CD45RA+)亚型；LPS刺激后两种DC亚型均上调CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ的表达,且分泌较高水平的IL-12和IFN-α。结论本研究成功获得重组小鼠Flt3配体蛋白,可用于制备具有良好生物学功能的cDCs和pDCs亚型,为下一步研究奠定材料基础。
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本文针对多份从广东阳江某猪场采集的疑似猪伪狂犬(PRV)感染猪的病变组织进行病毒核酸分析,分别应用PRV gB,gE和TK基因引物进行聚合酶链式反应(PCR)分析,结果显示以上基因均为阳性,结合该猪场发病猪临床表现,确认为PRV野毒感染。将该PRV野毒感染脑组织进行研磨、冻融和过滤除菌,接种健康新西兰兔,实验兔在1-2天后出现明显神经症状,并迅速死亡。取濒死兔脑组织,再次经研磨、冻融和过滤除菌后接
为研究清道夫受体(SR)在巨噬细胞识别重组FMDV VP 1-VP4蛋白中的作用,利用蛋白芯片技术对SR抑制剂处理后的小鼠腹腔巨噬细胞(pMΦ)负载重组FMDV VP1-VP4蛋白细胞上清中细胞因子的表达水平进行检测.结果显示,pMΦ可自发分泌IFN-γ、IL-6、IL-17、IL-10和TNF-α.抑制剂处理组IFN-γ、 IL-17、IL-10和TNF-α的水平在负载蛋白后24h均显著高于空白
实验室就送检的病死兔病料进行细菌分离，结合病死兔临床症状、剖检病理变化及实验室涂片镜检、细菌分离培养、生化试验及动物回归试验，确定分离菌为兔多杀性巴氏杆菌。
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