【摘 要】
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目的：探讨构建人类前列腺组织中富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1 (LRIG1)基因重组腺病毒载体的技术方法.方法：以人前列腺组织总cDNA为模板,PCR反应扩增LRIG1基因；用纯
【机 构】
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上海交通大学医学院附属瑞金医院卢湾分院泌尿外科
【出 处】
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第十次全国中西医结合男科学术大会暨第六届广西中医、中西医结合男科学术大会
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目的：探讨构建人类前列腺组织中富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1 (LRIG1)基因重组腺病毒载体的技术方法.方法：以人前列腺组织总cDNA为模板,PCR反应扩增LRIG1基因；用纯化后的LRIG1扩增片段,在T4连接酶的作用下,混合T载体,连接产物转化DH5α超级感受态细胞,碱裂解法提取质粒(命名为T-LRIG1)并测序无误后将基因LRIG1连接穿梭质粒,在重组酶LR Clonase Ⅱ作用下,与腺病毒骨架质粒pAd/PL-DEST发生体外重组反应,重组产物转化Top10超级感受态细胞,获取正确的重组腺病毒质粒pAD-LRIG1并包装扩增. 结果： T-LRIG1测序结果表明,PCR扩增得到的LRIG1完全正确,符合实验需要；获取了滴度为1×108PFU/mL的重组腺病毒pAD-LRIG1.结论：成功构建了基于人前列腺组织中的LRIG1基因重组腺病毒载体,为后期进行LRIG1基因的实验研究打下基础.
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