HaCaT皮肤角质细胞中CD34阳性亚群的干细胞特性及其对亚砷酸钠急性细胞毒性的耐受力研究

来源 :中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:limiao912
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  [目的]干细胞可能是癌症发生、发展的动力源.砷致癌过程中伴随着癌症干细胞的蓄积.皮肤是砷致癌作用的重要靶器官.本研究分析CD34阳性(CD34+)表皮细胞的干细胞特性及其对亚砷酸钠(NaAsO2)急性细胞毒性的耐受力,为利用干细胞模型进一步探索砷的致癌机制奠定基础.[材料和方法]利用免疫磁珠法从HaCaT细胞中分选出CD34+细胞,并用无血清角质细胞培养液对分选细胞进行培养和扩增;用流式细胞术检测CD34+细胞的富集率,观察细胞的全克隆(holoclone)形成能力,并用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测干细胞标记物的表达水平;将CD34+细胞和未分选的HaCaT细胞(对照细胞)用2.5、5、10、20、40、50、60、80、100和150 μmol/L NaAsO2处理24 h,以MTS法检测细胞活力;用RT-qPCR检测CD34+细胞和对照细胞中药物转运基因、解毒酶基因和抗氧化基因的表达水平;用GraphPad Prsim软件对数据进行统计分析.[结果]经免疫磁珠分选后,CD34+细胞富集率达88.6%±2.5%(与分选前相比p<0.001);CD34+细胞全克隆形成数量为对照组的2.4倍(p<0.01),CD34、p63、K5、K14、OCT4和SHH等干细胞标志物在CD34+细胞中的转录水平显著升高(p<0.05),分别为CD34阴性(CD34-)细胞的20.5倍、2.3倍、2.5倍、2.8倍、3.4倍和5.5倍;在20-150 μmol/L NaAsO2浓度范围内,CD34+细胞的细胞活力显著高于对照组(p<0.05),NaAsO2对CD34+细胞和对照细胞的半数致死量(LC50)分别为98.3 μmol/L和50.1 μmol/L; CD34+细胞中多种药物转运基因(ABCC1、ABCC2和ABCG2)的mRNA水平显著高于对照组(p<0.05),分别是对照组的3.6±0.3倍、1.6±0.3倍和2.4±0.4倍,解毒酶基因(GST-Pi)和抗氧化基因(HO-1和GCLC)的mRNA水平亦显著高于对照组(p<0.05),分别是对照组的2.7±0.3倍、2.9±0.4倍和2.3±0.2倍.[结论]CD34+细胞具备一定的表皮干细胞特性且对NaAsO2的急性细胞毒性具备更高的耐受力,这种耐受力可能与CD34+表皮干细胞中高表达的药物转运基因、解毒酶基因和抗氧化基因有关.
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