Miwi在小鼠卵细胞发生中的表达定位研究

来源 :中华医学会第六次全国生殖医学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shenzhixian
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  目的:了解MIWI蛋白和miwi基因在小鼠卵巢中有无表达及在卵泡/卵细胞发生过程中的表达特征,由此推测其在雌性配子发育过程中的可能作用。方法:Balb/C小鼠用于本研究。首先,我们分别用RT-PCR和Weatern Blot检测miwi基因和MIWI蛋白在0W、1W、2W、3W和性成熟雌鼠卵巢组织以及卵细胞和颗粒细胞里的表达;然后,利用量子点免疫荧光标记技术(QDs)检测MIWI蛋白在卵泡和卵子发生发育过程中的具体定位。结果:①RT-PCR检测结果显示miwi基因表达于0W、1W、2W、3W小鼠卵巢组织,但在成熟卵巢组织RNA提取物内未检测到。考虑到成熟卵巢组织内非生殖系细胞数量很高,相应生殖细胞的RNA量很低,于是我们将卵细胞(含颗粒细胞)以及颗粒细胞分别提取RNA并再次检测,结果在卵细胞内检测到miwi基因存在,而颗粒细胞里阴性表达。② Weatern Blot结果和RT-PCR的相似,除了0W卵巢组织内未检测到MIWI蛋白。③ QDs检测结果显示,MIWI蛋白限制性定位于卵细胞胞浆内,在颗粒细胞、卵泡膜细胞、血管内皮细胞以及间质细胞内均未见表达;MIWI蛋白最早出现于初级卵泡的卵细胞,其次见于次级卵泡、窦前卵泡、窦卵泡以及排卵前卵泡的卵细胞;而且,随着卵泡体积的增加,MIWI蛋白的染色强度逐渐变淡;未见MIWI蛋白在核周小体中高度浓缩表达的现象。结论:MIWI蛋白特异性表达于特定阶段卵泡的卵胞浆内,且随体积增加强度减弱,提示MIWI蛋白在卵泡和卵子发生发育过程中可能起有重要作用,例如卵泡腔扩增、或者维持卵泡/卵细胞发育静止状态。我们下步的研究将着重于MIWI蛋白在卵泡/卵细胞发育中的作用。
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