次乌头碱抑制TGF-β1诱导A549细胞上皮细胞间充质转化(EMT)及细胞迁移和侵袭

来源 :世界中医药学会联合会中药新药创制专业委员会成立大会暨第一届学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sunny_cui
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  目的:次乌头碱是一种二萜类双酯型乌头碱类化合物,广泛存在于乌头属植物中。上皮细胞间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在肿瘤转移中起重要作用。本研究探讨次乌头碱对TGF-β1诱导的肺癌A549细胞EMT的抑制作用及可能的机制。方法:体外培养A549细胞,MTT法检测次乌头碱对A549细胞的毒性。实验分为5组:①空白组;②TGF-β1 (5ng/ml)组;③TGF-β1(5 ng/ml)联合次乌头碱(2μM)组;④TGF-β1(5ng/ml)联合次乌头碱(4tM)组;⑤TGF-β1 (5ng/ml)联合次乌头碱(8μM)组,培养48小时。显微镜下观察细胞形态变化;收集细胞,提取总蛋白,Western blot法检测E-cadherin,N-cadherin,Snail,NF-κB的蛋白表达;划痕实验、Transwell实验及粘附实验分别检测细胞迁移、侵袭和粘附能力,以及次乌头碱的抑制作用。免疫荧光法检测E-cadherin、N-cadherin、NF-κB的表达。此外,测定了NF-κB抑制剂PDTC对TGF-β1上述作用的影响。结果:TGF-β1可以诱导A549细胞发生EMT,呈时间-剂量依赖关系;TGF-β1增强A549细胞迁移、侵袭、粘附能力。次乌头碱在低于16μM浓度对细胞无明显毒性。显微镜镜下,TGF-β1处理细胞由铺路石状上皮形态变成梭形、纺锤形。次乌头碱共处理组,细胞的梭形结构减少,部分恢复铺路石状上皮形态,以次乌头碱8μM组效果最为明显;Western blot结果显示,TGF-β1组N-cadherin,Snail,NF-κB蛋白表达均增加,E-cadherin蛋白表达下降,这可被次乌头碱所显著逆转;免疫荧光结果示,与空白组比,TGF-β1组E-cadherin荧光减弱而N-cadherin荧光增强,次乌头碱可显著逆转TGF-β1作用;次乌头碱可显著抑制TGF-β1诱导的细胞侵袭、迁移和粘附。此外,PDTC,与次乌头碱类似,可显著抑制TGF-β1的上述作用。结论:TGF-β1可诱导肺癌细胞A549发生EMT,这可被次乌头碱可在一定程度上所逆转。次乌头碱可通过抑制NF-κB通路抑制EMT,这提示次乌头碱可能具有抗肺癌转移潜力。
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