论文部分内容阅读
利拉鲁肽(Liraglutide,LR)作为胰高血糖素样肽1(GLP-1)类似物,是一种新型的Ⅱ型糖尿病治疗药,可通过其受体GLP-1R对多种神经退行性病变如阿尔兹海默病,帕金森症等具有神经保护作用.我们前期的动物实验表明,LR能够延迟Ⅱ型糖尿病小鼠视网膜感光细胞(神经细胞)的退行性变性,且与p-ERK/Nrf2/Trx信号通路相关.本研究利用高糖(High glucose,HG)体外诱导Neuro2A细胞制备模拟高糖细胞模型,进一步探讨研究了LR对神经细胞的保护作用机制.实验通过CCK8法筛选HG和LR的最终作用时间和浓度分别为24h,60mM和12h,50nM.实验设置4个组：对照组NC,高糖组HG,实验Ⅰ组HG+LR,实验Ⅱ组HG+LR+ERKi(ERK抑制剂).用AV-FITC/PI双染标记的流式细胞术及Caspase3活性检测各实验组Neuro2A细胞的凋亡情况.DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平.Real time-PCR检测Neuro2A细胞GLP-1R和Trx基因表达水平.Western blot检测细胞p-ERK/Nrf2/Trx蛋白表达水平.实验结果显示：与NC组比较,HG组Neuro2A细胞凋亡率、Caspase3活性及ROS水平显著升高；与HG组比较,HG+LR组Neuro2A细胞凋亡率、Caspase3活性及ROS水平显著下调；而与HG+LR组比较,HG+LR+ERKi组Neuro2A细胞凋亡率、Caspase3活性及ROS水平显著升高.Real fime-PCR结果显示：与NC组比较,HG组Neuro2A细胞GLP-1R和Trx的基因表达水平显著下调；与HG组比较,HG+LR组Neuro2A细胞GLP-1R和Trx的基因表达水平显著上调；而与HG+LR组比较,HG+LR+ERKi组Neuro2A细胞GLP-1R和Trx的基因表达水平显著下调.Western blot结果显示：与NC组比较,HG组Neuro2A细胞p-ERK/Nff2/Trx蛋白表达水平显著下调；与HG组比较,HG+LR组Neuro2A细胞p-ERK/Nrf2/Trx蛋白表达水平显著上调；而与HG+LR组比较,HG+LR+ERKi组Neuro2A细胞p-ERK/Nrf2/Trx蛋白表达水平显著下调.上述实验结果表明：LR可减少HG所致Neuro2A细胞ROS的产生从而减少细胞凋亡；LR通过上调GLP-1R、Trx基因及p-ERK/Nrf2/Trx信号通路蛋白的表达对HG所致Neuro2A起到抗氧化神经保护作用,ERK是关键信号蛋白之一.