【摘 要】
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利用RACE-PCR方法,扩增得到编码美国白蛾Hyphantria cunea Drury几丁质脱乙酰酶基因HcCDA2a.将该基因分别在大肠杆菌BL21和昆虫细胞BTI-Tn-5B1-4 (HighFive)中表达.经诱
【机 构】
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河北农业大学植物保护学院/生命科学学院,河北保定071000河北农业大学植物保护学院/生命科学学院,河北保定071000;北京农学院植物科学技术学院,北京102206
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利用RACE-PCR方法,扩增得到编码美国白蛾Hyphantria cunea Drury几丁质脱乙酰酶基因HcCDA2a.将该基因分别在大肠杆菌BL21和昆虫细胞BTI-Tn-5B1-4 (HighFive)中表达.经诱导表达后,Western blot分析表明HcCDA2a在大肠杆菌中成功表达61.4 kDa的蛋白,符合预期大小；在昆虫细胞BTI-Tn-5B1-4 (HighFive)中成功表达目的蛋白.利用昆虫细胞成功表达具有酶活力的重组HcCDA2a蛋白,对其酶学性质进行研究,结果表明：在酶液中添加不同浓度的金属离子,Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+对酶促反应有抑制作用,并随着浓度增大抑制作用越强；C02+在低浓度下对酶促反应有激活作用,但随着浓度增大,呈现出较强的抑制作用；Fe2+对酶促反应有激活作用,随着浓度增大,激活作用越强.由于pH可以改变酶的构象,引起酶分子中活性部位的结构发生变化,所以在过酸或过碱的条件下,酶活力会快速丧失.酶活力结果表明,当pH值为8.0时,酶活力最高.
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