【摘 要】
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构建融合幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(UreI),尿素酶B亚单位(UreB)和霍乱毒素B亚单位(ctB)的原核表达质粒pET28a(+)/ctB/UreI-B(简称pET28a(+)/BIB)并初步研究融合蛋白ctB/U
【机 构】
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四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,四川成都,610041
【出 处】
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第三届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
论文部分内容阅读
构建融合幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(UreI),尿素酶B亚单位(UreB)和霍乱毒素B亚单位(ctB)的原核表达质粒pET28a(+)/ctB/UreI-B(简称pET28a(+)/BIB)并初步研究融合蛋白ctB/UreI-B(简称BIB)的表达特性和免疫特性.方法：采用基因人工合成的方法获得BIB基因,构建pET28a(+)/BIB表达载体.将该质粒转化到E.coli Rosseta(DE3),经酶切和序列分析鉴定正确后IPTG诱导表达.优化融合蛋白诱导表达条件,亲和层析纯化后SDS-PAGE和Western blot分析.用BIB、IB(UreI-B)和佐剂CTB分别免疫小鼠,ELISA检测抗体产生情况.结果：构建的pET28a(+)/BIB表达载体与对应基因的序列同源性为100％.在37℃,0.75mmol/L IPTG诱导2小时后,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的30％,亲和层析纯化后蛋白纯度为83％.Western blot表明融合蛋白能与相应的抗体反应.BIB、IB和CTB免疫小鼠后第7天即产生IgG抗体,14天后抗体效价分别达到12800、3200和3200,第21天后效价分别为16000、8800和12800.结论：成功构建了能表达BIB蛋白的大肠杆菌表达菌株.融合蛋白BIB既含有分子内佐剂又具有H.Pylori定植关键分子,有很高的免疫原性和免疫反应性,pET28a(+)/BIB工程菌可作为幽门螺杆菌融合蛋白疫苗研究的候选菌株.
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