【摘 要】
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调查研究了家蚕病原白僵菌原生质体的分离制备、性状与再生回复,以及染色体组型和基因组DNA指纹图谱.结果以6mg/mLDriselase液爲酶解液,以0.7mol/LNaCI液(pH5.8)爲渗透压稳定
【机 构】
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浙江大學動物科學學院,浙江,杭州,310029,中國
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调查研究了家蚕病原白僵菌原生质体的分离制备、性状与再生回复,以及染色体组型和基因组DNA指纹图谱.结果以6mg/mLDriselase液爲酶解液,以0.7mol/LNaCI液(pH5.8)爲渗透压稳定剂,在30℃下轻轻振荡处理1.5h,能从嫩菌丝中分离出2-4×107个/mL原生质体,这是原生质体的适宜分离条件.原生质体球形,有较强折光性,无核率爲26.5％,有核率爲73.5％,其中1核的占53.5％,2核的占13.5％,3核及3核以上的占6.5％.原生质体再生回复的形式可观察到3种,在位相差显微镜下不能判别原生质体有无回复能力.综合考虑原生质体再生频率和菌落生长发育远度,原生质体再生回复用培养基的渗透压稳定剂以0.7mol/L葡萄糖较爲适当.家蚕病原白僵菌至少有6条染色体,估算大小爲2.5-7.2Mbp,分离菌株的染色体组型大小爲26.5-29.0Mbp,其染色体组型在分离菌株间存在多型性.对不同地域的家蚕病原白僵菌菌株进行RAPD-PCR,4个引物共扩增出138条DNA谱带,其中88条爲多态性带,多态检测率爲63.77％.不同地域的家蚕病原白僵菌菌株间已出现了一定的遗传分化,其基因组DNA指纹图谱表现出了多态性,其遗传分化与菌株地理来源无对应关系,与寄主域密切相关.
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