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目的: 随增龄出现的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)数量和生长因子含量的减少是导致老年性骨形成功能减退的重要原因。拟通过组织工程和基因工程结合的方法从种子细胞、生长因子、细胞支架三方面满足老年机体骨修复的需要,为这些方法在老年机体的应用提供参考。
方法 体外分离、扩增、BMP2 基因修饰 MSCs,检测细胞上清液中 BMP2 的表达;通过检测成骨细胞标志性蛋白如碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原(COLLI)、骨涎蛋白(BSP)、骨桥素(OPN)的表达观察老年大鼠 MSCs 的成骨分化能力;检测骨形态发生蛋白-2(BMP2)基因修饰的 MSCs 与磷酸三钙(TCP)复合物在裸鼠体内的异位成骨能力;将 BMP2 基因修饰的 MSCs/TCP 植入老年大鼠骨缺损部位,修复自体股骨 6mm 节段性骨缺损。
结果 BMP2 基因修饰的 MSCs 可以有效分泌 BMP2,诱导后第 7 天有 ALP、COLL I、OPN、BSP 的明显表达,并可诱导裸鼠体内异位成骨。放射学及组织学检测证明 BMP2 转染 MSCs 与 TCP 载体复合后可成功修复老年大鼠股骨节段性缺损。
结论 BMP2 基因修饰的老年 MSCs 可以恢复成骨分化能力,在体内可以成功修复老年大鼠股骨节段性骨缺损,组织工程和基因工程方法可能成为治疗老年性骨骼疾病的新途径。