【摘 要】
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目的 探索乌拉坦诱导肺癌发生过程中microRNA表达改变并鉴定肺癌发生相关的特异mi-croRNA.方法 将置于SPF环境饲养的BABL/c小鼠随机分为生理盐水对照组(n=30只)和乌拉坦处理组(n=30只),处理组每只小鼠经腹腔注射1 g·kg-1剂量乌拉坦溶液,每周1次,连续4周.对照组每只小鼠相应地经腹腔注射等量生理盐水,分别在初次给予乌拉坦之后的第6周、12周、24周剖杀对照组和处理组小
【机 构】
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广州医科大学化学致癌研究所 呼吸疾病国家重点实验室,广东广州510182
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目的 探索乌拉坦诱导肺癌发生过程中microRNA表达改变并鉴定肺癌发生相关的特异mi-croRNA.方法 将置于SPF环境饲养的BABL/c小鼠随机分为生理盐水对照组(n=30只)和乌拉坦处理组(n=30只),处理组每只小鼠经腹腔注射1 g·kg-1剂量乌拉坦溶液,每周1次,连续4周.对照组每只小鼠相应地经腹腔注射等量生理盐水,分别在初次给予乌拉坦之后的第6周、12周、24周剖杀对照组和处理组小鼠,获取相应的血清、肺癌组织以及相关脏器组织样本.提取第24周乌拉坦处理组小鼠总RNA,等RNA量混合肺癌组织以及肺癌旁组织RNA构建相应的肺癌组织RNA pool以及肺癌旁组织RNA pool.利用高通量Solexa sequencing技术,对肺癌组织以及肺癌旁组织RNA pool进行small RNA测序,在不同时间点运用Taqman qRT-PCR方法检测miRNA在组织、血清中的相对表达水平.结果 本研究成功建立乌拉坦诱发小鼠肺癌模型,乌拉坦初次处理后6周,小鼠肺表面尚未观察到肿瘤,病理学结果显示肺组织仅发生炎症细胞渗出等轻微改变.自初次给予BALB/c小鼠乌拉坦之后第12和24周,肺肿瘤发生率分别为90％及100％,肺肿瘤经病理学鉴定为肺腺癌.第24周乌拉坦处理组肺癌组织以及癌旁组织small RNA测序结果表明,癌组织以及癌旁组织富含大量22 nt左右长度的microRNA分子,利用Mireap软件预测到一簇新microRNA分子.依据一定的筛选原则,在第24周肺癌及癌旁组织中鉴定到23个差异表达microR NA.基于Solexa sequencing结果中肺组织miR-1a差异表达改变明显以及miR-1a转录本的高丰度,拟选定miR-1a进一步研究.运用Taqman qRT-PCR方法检测乌拉坦诱发BALB/c小鼠肺癌模型第6周、12周、24周肺组织中miR-1a相对表达水平.相对生理盐水对照组,在第6周时,乌拉坦处理组肺组织中miR1a表达下调；第12周时,相对生理盐水对照组,乌拉坦处理组肺癌旁组织以及肺癌组织中miR-1a表达下调.在第24周,本研究也证实相对生理盐水对照组,乌拉坦处理组肺肿瘤组织中miR-1a表达下调.此外,相对于生理盐水对照组,本研究也证实在乌拉坦处理组肾、肝组织中尚未观察到miR-1a表达异常改变.在第6周、12周、24周三个时间点,相对生理盐水对照组,miR-1a在乌拉坦处理组血清样本中维持低表达水平.结论 乌拉坦诱发肺癌发生发展过程中,microRNA表达发生异常改变；miR-1a在肺组织及血清中的维持表达下调,表明miR-1a与乌拉坦诱发的肺癌相关.
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