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目的:研究microRNA(miRNA)在HBx缺失突变体致人肝细胞异常增殖中的作用及其相关机制,试图探讨HBx致癌变新的机制。材料:脂质体lipofectmine2000和Trizol(Invitrogen),2100生物分析仪(美国Agilent公司),芯片杂交系统(Agilent),All-in-oneTM miRNA qRT-PCR(GeneCo-poeia),miRNA-模拟物(mimics)及阴性对照(GeneCopoeia),鼠抗E2F1抗体(Bioworld);兔抗cy-clin G1抗体(santa cruz),鼠抗cyclin D1抗体(santacruz);鼠抗β-actin抗体(Abcam)。方法:研究发现了肝癌组织中HBx变异频发,并发现了相关的缺失突变体(命名为HBx-d382),之后建立T稳定表达HI3x-d382及HBx的肝细胞株(L02/ HBx-d382和L02/HBx),并发现HBx-d382促L02细胞恶性转化作用可能与其增强G1期调控相关基因如CyclinD、 CyclinGl、 E2F1的表达相关。本研究以L02/HBx-d382和L02/HBx为研究对象,L02/pcDNA3. 0为对照,利用miRNA芯片技术检侧L02细胞系中miRNA的表达,之后用实时荧光定量PCR对上述miRNA进行验证。选取在L02/HBx-d382和L02/ HBx细胞中均表达明显下调的两个miRNAs miR-338-3P,miR-551b进行功能研究,合成相应的模拟物.通过 qRT-PCR,筛选最佳浓度;分成三组进行功能研究:①实验组(转染miR-338-3P-mimics和miR-551 b-mimics) ,②对照组(转染miR-mimics-NC) .③空白组(单加转染试剂Ii-pofectamin) ,通过脂质体转染到细胞中,MTI检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期,Real-timePCR和Western Blot检测CvclinDl、CvclinGl和E2F1的改变。结论:①HBx及其缺失突变体能影响L02细胞的miRNA表达谱,②miR-338-3p和miR-551b在转染野生型及突变型X基因的细胞中均明显下调,其低表达与Cyc1inD1,CyelinGl及E2F1的表达成反比,miR-338-3p和miR-551h可能通过调控上述基因而调节了细胞的生长。根据靶基因预测网站:miRbase、Targetscan,Pic-tar和miRanda,我们发现miR-338-3p可与CyclinDl的3 UTR结合,因此 CyclinDl极可能为。iR-338-3p的目的基因,后续实验将采用双荧光素酶报告检测系统进一步确认miR-338-3p的靶标。本研究从miRNA人手,从一种新的角度探素它们在HBx相关性肝癌的发生发展中的作用及其机制,也为今后的研究打下了坚实的基础。