【摘 要】
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目的 通过皮质酮造成PC12细胞损伤,考察新型磷酸二酯酶4抑制剂氯比普兰对PC12细胞的保护作用及其作用的信号通路.方法 采用不同浓度皮质酮处理PC12细胞,通过噻唑蓝(MTT)
【机 构】
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南方医科大学药学院神经精神药理学科,广东广州510515
【出 处】
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第十六届全国神经精神药理学学术会议
论文部分内容阅读
目的 通过皮质酮造成PC12细胞损伤,考察新型磷酸二酯酶4抑制剂氯比普兰对PC12细胞的保护作用及其作用的信号通路.方法 采用不同浓度皮质酮处理PC12细胞,通过噻唑蓝(MTT)实验确定皮质酮的神经毒性剂量,在此基础上考察氯比普兰对PC12细胞的保护作用,并利用Hoechst染色考察皮质酮及氯比普兰对细胞形态的影响；通过Western blot实验考察氯比普兰在基础条件及皮质酮处理条件下对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、蛋白激酶A(PKA)、糖原合成激酶3β(GSK-3β)以及细胞外信号调控激酶(ERK1/2)磷酸化/活性的影响；通过免疫细胞化学(ICC)实验确定在给予皮质酮处理下及氯比普兰与皮质酮共处理下,p-CREB在细胞内的定位,通过给予PKA抑制剂H-89及转染CREB特异性siRNA考察阻断PKA及敲低CREB后,氯比普兰是否能发挥其神经保护作用,以探讨其作用的信号通路.结果 皮质酮在50～800 μmol·L-1可以浓度依赖性地减少细胞活力,在400 μmol· L-1时损伤具有显著统计学差异,而通过给予氯比普兰0.3125～5 μmol· L-1,则可以显著对抗皮质酮所导致的细胞活力的下降,逆转细胞核形态学变化；Western blot实验发现,在基础条件下下,氯比普兰可以促进PKA,GSK-3β以及CREB的磷酸化,并呈时间及剂量依赖性,而ERk1/2则未见有明显变化；氯比普兰亦可逆转皮质酮对PKA,GSK-3β以及CREB磷酸化的降低作用；进一步的ICC结果显示,皮质酮处理PC12时,胞核内pCREB水平较低,而给予氯比普兰则可以显著增加胞核内pCREB的水平；H-89阻断PKA活性及siRNA敲低CREB的表达后,可一定程度阻断氯比普兰的神经保护作用.结论 氯比普兰可以对抗皮质酮所致的PC12损伤,其机制可能是与激活PKA蛋白磷酸化继而引起CREB(Ser133)及GSK-3β(Ser9)的磷酸化并增加胞核内pCREB(Ser133)的含量,促进细胞存活有关.
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