【摘 要】
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目的探 究鹦鹉热衣原体(Chlamydiapsittaci, Cps)质粒蛋白CPSIT_p8抗感染免疫保护效果,分析其可能的保护机制,为研制预防和治疗抗Cps感染的亚单位疫苗奠定基础.方法 Cps质粒蛋白CPSIT_p8经腹腔途径免疫雌性BALB/c小鼠,免疫42d后,经呼吸道鼻滴接种最佳感染剂量5×105 IFUs Cps 6BC,以评价CPSIT_p8蛋白抗Cps感染的保护效果,并探讨其机制
【机 构】
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南华大学医学院病原生物学研究所,湖南省分子靶标新药研究协同创新中心,湖南省特殊病原体重点实验室,衡阳421001
【出 处】
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21世纪第五届全国人兽共患病学术研讨会
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目的探 究鹦鹉热衣原体(Chlamydiapsittaci, Cps)质粒蛋白CPSIT_p8抗感染免疫保护效果,分析其可能的保护机制,为研制预防和治疗抗Cps感染的亚单位疫苗奠定基础.方法 Cps质粒蛋白CPSIT_p8经腹腔途径免疫雌性BALB/c小鼠,免疫42d后,经呼吸道鼻滴接种最佳感染剂量5×105 IFUs Cps 6BC,以评价CPSIT_p8蛋白抗Cps感染的保护效果,并探讨其机制；以制备的小鼠血清多克隆抗体为一抗,运用间接免疫荧光法(immunofluorescence assay, IFA)分析CPSIT_p8蛋白在感染细胞中的定位情况；同时,进行小鼠体内外中和试验,以评估小鼠血清中CPSIT_p8特异性抗体的中和能力.结果 腹腔免疫后,小鼠血清中检测到了高效价的特异性抗体；免疫小鼠脾细胞产生的IFN-γ水平明显高于对照组(F=9192,P＜0.001).CPSIT_ p8免疫组小鼠经Cps 6BC呼吸道感染后,取肺组织进行培养,包涵体数量明显低于对照组(F=24.31,P＜0.05)；ELISA法检测肺组织匀浆上清中细胞因子水平,蛋白免疫组比对照组具有显著低的IFN-γ水平(F=100.8,P＜0.001)；肺组织经H&E染色和S-P免疫组织化学染色,对照组肺组织弥漫性炎性细胞大量浸润,肺泡毛细血管腔和肺泡腔充血水肿,而CPSIT_p8免疫组肺组织病理改变明显比对照组轻,并能清晰识别肺泡结构,炎症清除明显；而且,免疫组织化学染色显示免疫组衣原体棕黄色颗粒比对照组明显少.在Cps感染HeLa细胞36h后,采用IFA法分析CPSIT_p8蛋白定位于包涵体内.小鼠体内外中和试验,取肺组织培养,进行包涵体计数,显示CPSIT_p8免疫组和对照组包涵体数量无统计学差异(F=1.462,P＞0.05；F=0.6,P＞0.05).结论 CPSIT_p8蛋白经腹腔免疫可诱导BALB/c小鼠产生明显的抗Cps感染保护作用；其可能的免疫保护机制与诱导高效价的特异性抗体及强有力的Th1型细胞免疫应答有关,提示CPSIT p8蛋白是一种潜在的候选疫苗,对于疫苗研究与开发具有重要的价值；CPSIT_ p8蛋白定于包涵体内,为一种非分泌性蛋；此外,发现免疫小鼠血清中的CPSIT_ p8特异性抗体没有中和能力.
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