【摘 要】
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将构建好的重组质粒PET-VP2转化宿主菌BL21,利用IPTG(1mmol/L)诱导实现了PPVVP2基因的高效表达.通过Western-blot检测证明表达的重组蛋白具有良好的免疫学活性.表达产物经HisBind层析柱纯化后作为诊断抗原初步建立了检测PPV抗体的间接ELISA方法.结果表明:抗原的最佳包被浓度为3.5μg/ml,血清的最佳稀释度为1:40,待检血清阳性标准初步定为OD490＞0
【机 构】
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南京农业大学农业部畜禽疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京,江苏,210095 江苏省畜牧兽医总站,
【出 处】
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中国畜牧兽医学会第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会
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将构建好的重组质粒PET-VP2转化宿主菌BL21,利用IPTG(1mmol/L)诱导实现了PPVVP2基因的高效表达.通过Western-blot检测证明表达的重组蛋白具有良好的免疫学活性.表达产物经HisBind层析柱纯化后作为诊断抗原初步建立了检测PPV抗体的间接ELISA方法.结果表明:抗原的最佳包被浓度为3.5μg/ml,血清的最佳稀释度为1:40,待检血清阳性标准初步定为OD490＞0.51,且OD待检血清/OD阴性血清＞2.1。
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根据已发表的猪附红细胞体16SrRNA基因序列设计一对引物,以从患附红细体病的病猪血液中提取的猪附红细胞体DNA作为模板,建立了猪附红细胞体的PCR诊断方法.并将所获得的PCR产物进行测序.用该方法对20例疑似患猪血液进行PCR扩增,阳性率为80％,与姬姆萨、瑞氏、吖啶橙染色的符合率分别为30％、23％、92.3％.核酸序列测定结果与GENBANK中已登录的附红细体病16SrRNA基因部分序列的同
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