【摘 要】
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本文利用特异性引物,使用RT-PCR方法扩增GSK3β片段,将目的片段与pMD18T载体连接,经转化、扩增、抽取后,阳性克隆送测序.利用双酶切将GSK3β基因定向插入同携带EGFP基因的逆
【机 构】
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西安交通大学医学院第二附属医院骨二科 710004西安市
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本文利用特异性引物,使用RT-PCR方法扩增GSK3β片段,将目的片段与pMD18T载体连接,经转化、扩增、抽取后,阳性克隆送测序.利用双酶切将GSK3β基因定向插入同携带EGFP基因的逆转录病毒表达质粒,进行双酶切及测序鉴定.将鉴定成功的逆转录病毒质粒和另外两种辅助质粒用磷酸钙法共转染293T细胞,收集、浓缩逆转录病毒及利用荧光计数法检测滴度.从成年SD大鼠股骨分离培养骨髓间充质干细胞,利用流式细胞法检测骨髓间充质细胞干细胞相关表面抗原标记物CD44(+),CD90(+),CD45(-)进行鉴定.获得的逆转录病毒载体感染骨髓间充质干细胞后,利用流式细胞仪检测转染率,并观察目的基因及绿色荧光表达情况.结果成功构建GSK3β基因及EGFP基因共表达的逆转录病毒载体，并成功转染骨髓间充质干细胞。
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