【摘 要】
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通过PCR的方法实现了三角酵母D-氨基酸氧化酶基因（DAAO）和6-His多肽基因的融合；将融合基因连接到质粒载体pET-28a，经过菌落PCR筛选得到了重组质粒pET-DAAOHis ；重组质粒转化BL21(DE3) 感受态细胞, 得到重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-DAAOHis 。分别对重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-DAAO 和BL21(DE3)/pET-DAAOHis进行
【机 构】
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清华大学化学工程系生物化工研究所 北京 100084 北京科技大学环境工程系 北京 100083
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通过PCR的方法实现了三角酵母D-氨基酸氧化酶基因（DAAO）和6-His多肽基因的融合；将融合基因连接到质粒载体pET-28a，经过菌落PCR筛选得到了重组质粒pET-DAAOHis ；重组质粒转化BL21(DE3) 感受态细胞, 得到重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-DAAOHis 。分别对重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-DAAO 和BL21(DE3)/pET-DAAOHis进行诱导表达和酶活测定，结果表明，融合蛋白DAAOHis的酶活比DAAO的酶活要高出70％，说明通过基因工程手段可以实现DAAO和6-His多肽的融合表达，为D-氨基酸氧化酶的分离纯化和物理化学性质的后续研究奠定了基础。
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研究了以玉米秸杆为底物采用固态发酵工艺生产纤维素酶的最佳工艺条件。实验结果表明：采用900g/l 的丙酸, 3g/l 的盐酸，121℃蒸解90min 处理玉米秸秆，其纤维素、半纤维素、木质素三组份的分离效果最好。处理过的玉米秸杆纤维素含量为88.29﹪。以处理过的玉米秸秆为底物，添加10﹪木薯酒糟、0.2﹪KH2PO4、0.1﹪ 蛋白胨、0.2﹪ MgSO4·7H2O、3﹪（NH4）2SO4、0.
使用溶菌酶作为标本蛋白，考察了膜结晶的操作原理及优点。发现膜结晶可通过控制脱水剂的浓度来调节水的蒸发速率并减少结晶时间。着重分析了结晶过程中脱水剂、沉淀剂、添加剂等因素的影响。对在以NaCl 作为沉淀剂，醋酸钠作为缓冲剂的条件下得到的溶菌酶结晶进行了红外分析。
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