新的海葵神经毒素基因的克隆、功能表达及活性鉴定

来源 :第一届海洋生物高技术论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wenhui10005
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
根据已发现的海葵神经毒素Ap-B两端的氨基酸序列,设计筒并引物,用RT-PCR的方法,从采自湛江的侧花海葵Anthopleurln sp触手总RNA中分离出四个新的海葵毒素基因。将海葵神经毒素基因连接到融合表达载体pTRX的TrxA基因的3端,构建成符合读码框的融合表达质粒。融合表达质粒在工程菌BL21DE3中得到了高表达。经过镍亲和层析得到纯化的融合蛋白,融合蛋白经蛋白酶3C酶切后,过G50分子筛得到纯的重组海葵神经毒素。利用激光飞行时问质谱测定四个重组海葵神经毒素rHk2a,rHk7a,rHk8a,rHk16a的分子量分别为5078.5,4972.7,4993.0和5010.6,与根据氨基酸序列计算结果一致5kD。圆二色谱结果表明重组海葵神经毒素的二级结构与Ap-B相似,即重组海葵毒素折叠正确。 对大鼠高体心房增强收缩作用的研究表明,四种重组海葵神经毒素在正常K-H溶液和低钙K-H溶液中都可以增强心房收缩。其中rHK2a在低钙情况下具有最强的增强收缩能力,可使心房收缩增强10.38倍。rHK7a的作用时间最长,用药后240min仍然具有强心作用。
其他文献
采用传统分离手段对我国南海海域4种海绵体内的微生物进行了分离、培养,对其中的64株微生物每种海绵16株进行了RAPD-PCR基因多态性分析。研究证明,海绵微生物是可以通过传统分
报道了海滨锦葵植物基因组DNA的提取方法、RAPD-PCR反应程序及RAPD标记对海滨锦葵两对组合亲本及其杂交后代进行的分子鉴定。初筛出的38个引物中有20个52.6%能在J2×J1组合亲
从我国南海6种海绵体内分离到66株放线菌,对所得菌株采用16S rDNA PCR-RFLP和RAPD两种基因指纹图技术进行分析,发现分离到的海绵放线菌具有丰富的基因多样性,有望从中筛选出有开
脂多糖葡聚糖结合蛋白Lipopolysaccharide and beta-1,3-glucan binding protein,LGBP作为模式识别蛋白在无脊椎动物的免疫系统中发挥着重要作用。用T3通用引物对感染鳗弧菌栉
会议
单细胞真核藻类一小球藻是一种重要的微藻资源。近年来,随着藻类生物技术的迅速发展,有大量的研究工作被报道。在分子生物学领域,研究集中在小球藻的核基因组和叶绿体基因组、重
采用RDP试剂提取杂色鲍Haliotis diversicolor不同免疫时相肝脏的总RNA,经olgotex试剂盒纯化得到mRNA。根据SMARTswitching mechanism at 5end of RNA transcript原理,利用含sf
会议
目的:克隆合浦珠母贝GIP结合蛋白亚基,并对其序列及表达分布进行研究。 方法:利用RNAzol从合浦珠母贝外套膜组织中提取总RNA,OligodT作引物进行反转录合成cDNA,并根据不同物
会议
基因组学和生物信息学是最近发展起来的新型学科。它们以分析生物的全套遗传信息、释读大量基因资料、破译全部遗传密码为内容,以开发利用生物功能基因资源为目的,是生物学研究
会议
根据GENEBANK中紫菜属的别藻蓝蛋白基因序列,设计并合成简并引物,以野生坛紫菜叶绿体DNA为模板,PCR扩增并回收扩增产物;将PCR产物克隆到pMD18-T上,重组子经PCR和酶切鉴定,通用引物
会议
通过对水母触手cDNA文库的EST分析,得到一个576bp的编码水母半胱氨酸蛋白酶抑制剂的全长cDNA序列。它的读码框编码131个氨基酸残基的前体蛋白,包括18个氨基酸的信号肽和113个氨
会议