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根据已发现的海葵神经毒素Ap-B两端的氨基酸序列,设计筒并引物,用RT-PCR的方法,从采自湛江的侧花海葵Anthopleurln sp触手总RNA中分离出四个新的海葵毒素基因。将海葵神经毒素基因连接到融合表达载体pTRX的TrxA基因的3端,构建成符合读码框的融合表达质粒。融合表达质粒在工程菌BL21DE3中得到了高表达。经过镍亲和层析得到纯化的融合蛋白,融合蛋白经蛋白酶3C酶切后,过G50分子筛得到纯的重组海葵神经毒素。利用激光飞行时问质谱测定四个重组海葵神经毒素rHk2a,rHk7a,rHk8a,rHk16a的分子量分别为5078.5,4972.7,4993.0和5010.6,与根据氨基酸序列计算结果一致5kD。圆二色谱结果表明重组海葵神经毒素的二级结构与Ap-B相似,即重组海葵毒素折叠正确。
对大鼠高体心房增强收缩作用的研究表明,四种重组海葵神经毒素在正常K-H溶液和低钙K-H溶液中都可以增强心房收缩。其中rHK2a在低钙情况下具有最强的增强收缩能力,可使心房收缩增强10.38倍。rHK7a的作用时间最长,用药后240min仍然具有强心作用。