【摘 要】
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目的：构建LYRM1基因的沉默表达载体并在3T3-L1脂肪细胞中验证其干扰效率.方法：针对LYRM1 mRNA设计并合成三条siRNA干扰片段,以3T3-L1前体脂肪细胞为工具细胞分别单独转染siRNA干扰片段,共同转染siRNA干扰片段和LYRM1-Cherry-RNAi Reporter质粒.荧光显微镜下观察荧光强度,荧光定量PCR检测LYRM1 mRNA表达水平,筛选有效的干扰序列.以干扰效
【机 构】
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浙江大学医学院附属儿童医院内分泌科 南京医科大学附属南京妇幼保健院儿童保健科
【出 处】
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中华医学会第十八次全国儿科学术会议
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目的：构建LYRM1基因的沉默表达载体并在3T3-L1脂肪细胞中验证其干扰效率.方法：针对LYRM1 mRNA设计并合成三条siRNA干扰片段,以3T3-L1前体脂肪细胞为工具细胞分别单独转染siRNA干扰片段,共同转染siRNA干扰片段和LYRM1-Cherry-RNAi Reporter质粒.荧光显微镜下观察荧光强度,荧光定量PCR检测LYRM1 mRNA表达水平,筛选有效的干扰序列.以干扰效率最高的siRNA序列构建LYRM1-RNAi载体.将LYRM1基因的沉默表达载体转染至3T3-L1前体脂肪细胞,验证干扰效率.结果：(1)siRNA297干扰效率为42％.(2)LYRM1-RNAi载体干扰效率为39％.结论；本研究成功构建LYRM1基因沉默表达载体,其干扰效率为39％,为进一步研究肥胖相关基因LYRM1的功能提供可能技术支持.
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