滞育是昆虫受环境条件诱导所产生的静止状态的一种类型,是昆虫长期适应不良环境而形成的一种遗传特性.近年来,国内外学者对昆虫滞育进行了广泛深入的研究,包括昆虫滞育的生态生理学、滞育的环境调控、滞育的光周期调控机制、滞育的激素调控以及滞育的分子调控等.在滞育期,昆虫体内会特异表达一些保护性蛋白用以应付不利环境的胁迫,这就是滞育关联蛋白(Diapause Associated Protein,DAP).研究烟蚜茧蜂的滞育关联蛋白的机理,在生物防治方面,可以用来调控烟蚜茧蜂的的滞育时间,延长储存期和货架期以提高防效.蛋白质组学研究可以定量检测蛋白表达水平和蛋白转录后修饰蛋白亚型以及蛋白质－蛋白质相互作用.双向电泳是目前蛋白质组学研究中最常用的分离技术.实验过程中在双向电泳的常用条件基础上进行了优化.分别获取足量正常发育和滞育期的烟蚜茧蜂僵蚜以及滞育解除后的烟蚜茧蜂成虫.第一是总蛋白的提取,综合文献和实验室前期试验基础,采用裂解液法.首先将样品进行液氮研磨,然后加入裂解液,离心后用GEHealthcare 公司的2-D Cleanup Kit 试剂盒进行样品纯化,以去除盐离子和核酸的干扰.蛋白质浓度测定采用改良型Bradford 法试剂盒.事实证明,样品提取质量较高,后续分离效果较好.第二是双向电泳条件.第一向等电聚焦采用Bio-Rad 仪器说明书推荐的主动水化上样,一般为50V,12-16h(17℃).其余条件根据不同长度的胶条进行不同的设置.升压过程分步骤缓慢进行,作用包括除盐、升压、聚焦和最后的保持状态.17cm 胶条在1000v-10000v 升压过程中添加一个5000v 的步骤,适当延长聚焦时间使程序达到最高电压.第二向聚丙烯酰胺凝胶电泳,采用12.5％分离胶.第三是染色,采用胶体考马斯亮蓝染色.比较普通的考马斯亮蓝染色：采用固定液(45.5％甲醇、4.6％乙酸)、染色液(45.5％甲醇、4.6％乙酸、0.1％G-250)、脱色液(5％甲醇、7.5％乙酸)和胶体考马斯亮蓝染色：固定液(40％乙醇、10％乙酸)、脱色液(去离子水)、染色液(10％磷酸、10％硫酸铵、0.12％G250、20％甲醇)、脱色液(去离子水),发现胶体考染的灵敏度更高,显示的蛋白点更多,且两种方法的背景干扰等都较小.对烟蚜茧蜂样品提取、双向电泳以及染色等条件进行优化,使效果得到了改善,以便进行下一步工作.