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[目的]铅是环境中广泛存在的一种重金属元素,具有很强的神经发育毒性.血脑屏障则对早期铅暴露尤为敏感,文献显示铅可以显著降低其紧密连接蛋白(TJ) occludin与ZO-1的水平,但是其下调机制并不明确.而TJ的破坏与内质网应激密切相关,既往报道发现在不同的细胞中,铅可以显著上调作为内质网应激标记分子的78KD葡萄糖调节蛋白(GRP78),因此本文旨在探索GRP78在铅下调紧密连接蛋白的关键作用.[材料和方法]体内模型选取21d龄SD大鼠,按完全随机方法分为对照组和三个剂量的染铅组(100,200和300ppm).暴露8w后进行硝酸镧灌注检测渗漏情况,Western blot检测脑组织TJ蛋白的表达,提取脑微血管进行磷酸化蛋白芯片检测.体外模型选择大鼠大脑微血管内皮细胞系(RBE4)作为研究对象,采用星型胶质瘤细胞(C6)上清共培养RBE4细胞,MTT法筛选最佳剂量,RT-PCR检测GRP78的mRNA水平,Western blot检测GRP78,P-SRC,C-SRC,ZO-1,occludin等蛋白水平.GRP78的siRNA干涉技术和SRC磷酸化的阻断剂用于研究分子间调节的上下游关系.使用免疫细胞化学和免疫电镜检测GRP78在细胞中分布以及定位,生物素标记活细胞膜蛋白检测质膜GRP78的表达,中和抗体技术封闭膜GRP78后检测信号通路改变.[结果]体内模型证明铅引起硝酸镧颗粒的渗漏,降低occludin与ZO-1的蛋白水平,蛋白芯片显示SRC的磷酸化水平变化显著(3.19倍).体外模型中,10μM在6-48时间点上均能引起SRC的磷酸化水平显著升高(24h最高),总SRC水平被负反馈抑制,SRC的磷酸化阻断剂实验显示SRC的磷酸化在铅负向调节occludin,正向调节ZO-1.进一步,在6-48h时间点上均能引起GRP78的mRNA和蛋白水平的显著身高(24h最高),GRP78的siRNA干涉技术实验显示GRP78同样负向调节occludin,正向调节ZO-1,方向同SRC的磷酸化一致.同时证明GRP78是SRC的磷酸化的上游分子.免疫细胞化学发现对照组GRP78的分布在近核区,铅处理后远核区分布明显增加.免疫电镜结果显示铅能够显著引起GRP78定位的改变,内质网以外的区域以及细胞膜上明显增多.生物素化膜蛋白实验进一步证明铅可以引起细胞膜GRP78蛋白水平上调,但是中和抗体封闭后并未引起SRC的磷酸化的逆转.[结论]GRP78作为关键的分子通过SRC的磷酸化参与铅特异性下调occludin,而不是ZO-1.因为GRP78作为受体引起该通路的变化得以排除,推测这个过程更有可能通过胞内完成.