【摘 要】
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绿原酸水解酶可从天然底物中释放咖啡酸,是获得工业抗氧化剂的新的潜在关键工具.本研究以绿原酸为唯一碳源,经常压室温等离子诱变获得一株具有良好遗传稳定性和高绿原酸
【机 构】
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食品科学与技术国家重点实验室 江苏无锡214000
【出 处】
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中国食品科学技术学会第十四届年会暨第九届中美食品业高层论坛
论文部分内容阅读
绿原酸水解酶可从天然底物中释放咖啡酸,是获得工业抗氧化剂的新的潜在关键工具.本研究以绿原酸为唯一碳源,经常压室温等离子诱变获得一株具有良好遗传稳定性和高绿原酸水解酶活性的A.spergillus nigerSD14.721(0.081 U/mL).并以其为表达菌株发酵获得绿原酸水解酶,经硫酸铵分级沉淀、弱阴离子交换色谱和凝胶排阻色谱纯化,比酶活4.35 mU/mg,纯化倍数为4.58,回收率可达6.25％.由凝胶排阻色谱估算蛋白分子量在350-400 ku,结合SDS-PAGE电泳结果,表明该蛋白存在四个相同亚基(97 ku).纯化所得绿原酸水解酶具有较好的热稳定性和pH稳定性,其最适温度为60℃,最适pH为7.0,且在碱性条件下更为稳定.以绿原酸为底物的Km值为1.85μmol/L,较其他已报道的具有绿原酸水解活性的酶类底物亲和性更强.所得绿原酸水解酶是一种尚未报道的新酶,其较高的绿原酸水解活性和较强的底物亲和性有望推进绿原酸水解酶的进一步应用,包括降低绿原酸膳食风险,指导富含绿原酸的天然原料,如：咖啡豆、苹果和葵花籽等中的绿原酸脱除和咖啡酸的释放.
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