【摘 要】
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胰岛素信号通路是一条相对保守的信号传导途径,在细胞生长发育及代谢调控中发挥重要作用,并可以影响细胞与外界环境的相互作用.已有研究表明,寄生蠕虫不仅存在胰岛素样因
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃,兰州 730046
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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胰岛素信号通路是一条相对保守的信号传导途径,在细胞生长发育及代谢调控中发挥重要作用,并可以影响细胞与外界环境的相互作用.已有研究表明,寄生蠕虫不仅存在胰岛素样因子(insulin-like peptide,LP),同时还存在与哺乳动物同源性很高的胰岛素样受体(insulin receptor,IR)及下游分子,并能利用宿主胰岛素调节自身代谢和生长发育.目前,猪带绦虫(Taenia solium,Ts)、细粒棘球绦虫全基因组测序均已完成.本研究根据我们完成的牛带绦虫全基因组注释信息和GeneDB的相关数据,采用生物信息学比较分析了寄生蠕虫胰岛素受体的基因序列,并根据其保守区序列设计引物,从牛带绦虫总RNA中RT-PCR扩增出TsaIR-4810基因的配体结合域(LBD,ligand binding domain),片段大小为1687bp.Smart软件分析表明,该片段含有RL(receptor-L-domain)和FU(furin-rich repeat)组成的LBD区.将TsaIR-4810的LBD区插入原核表达载体pET-30a,构建重组表达质粒pET-TsaIR,转化入大肠杆菌BL21,用IPTG进行诱导表达,并对表达条件进行优化.SDS-PAGE结果显示,获得与预期相符的67ku的重组蛋白,表明目的蛋白在大肠杆菌BL21中成功表达.在2×YT培养基中于30℃、IPTG终浓度0.3 m mol/L的条件下诱导6h,重组蛋白的表达量达到最大值,且主要以包涵体形式存在.裂解菌体后,用纯化的TsaIR包涵体蛋白免疫家兔.Western-blot分析表明,该蛋白能刺激家兔产生相应的抗体,并能与阳性血清进行特异性免疫反应,证明表达蛋白具有良好的抗原性.综上所述,本文对TsaIR蛋白进行了初步研究,为进一步研究其与牛带绦虫胰岛素样因子的结合功能,以及对葡萄糖代谢的调节作用奠定了基础.
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