【摘 要】
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纤维素是自然界中数量最大的可再生性资源,它的降解依赖于纤维素酶系.内切葡聚糖酶EGI是纤维素酶系中的主要组份,由催化结构域、连接肽和结合结构域组成.本研究以里氏木
【机 构】
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上海海洋大学食品学院 上海201306
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纤维素是自然界中数量最大的可再生性资源,它的降解依赖于纤维素酶系.内切葡聚糖酶EGI是纤维素酶系中的主要组份,由催化结构域、连接肽和结合结构域组成.本研究以里氏木霉、拟康氏木霉和长枝木霉的eg1基因为模板,通过DNA改组技术构建突变体库,并对酵母重组分泌的表达突变体筛选.结果表明：对3种木霉成熟肽编码序列进行DNA改组,构建突变体库,通过活性筛选获得高活性突变体,命名为New8.诱导培养96h达到活性最高1.97 U/mL,是3种木霉的野生型EGI平均酶活的2倍；最适温度为50℃,最适pH为5.6.SDS-PAGE电泳显示New8亚基蛋白分子量比理论分子量偏大.New8 eg1序列与里氏木霉,拟康氏木霉和长枝木霉的相似度分别为94％,95％,96％,有114个重组位点和4个突变位点.在4个突变位点中,V10A和F192L未引起New8 EGI疏水性改变,G100S和S318G引起亲水性改变.蛋白质三級结构预测结果表明,突变位点S318G在催化结构域的活性中心附近.这一研究将为今后纤维素酶系中其它酶类(CBH、BG)的基因改造,乃至构筑高效的纤维素降解体系奠定良好的前期基础.
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