【摘 要】
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[目的]本研究旨在构建酵母双杂交牛源犬新孢子虫cDNA表达文库,进而为研究新孢子虫功能结构以及为其入侵宿主致病机理研究提供良好的试验体系.[方法]体外培养牛源犬新孢子
【机 构】
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延边大学农学院,动物医学系,吉林,延吉 133002
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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[目的]本研究旨在构建酵母双杂交牛源犬新孢子虫cDNA表达文库,进而为研究新孢子虫功能结构以及为其入侵宿主致病机理研究提供良好的试验体系.[方法]体外培养牛源犬新孢子虫延边株,纯化并提取虫体总RNA,应用SMART技术合成双链cDNA(ds cDNA).利用CHROMA SPINT+TE-400Columns纯化柱纯化ds cDNA,并与线性化的pGADT7-Rec共转化酵母菌菌株Y187,以同源重组的方式在酵母细胞内构建牛源犬新孢子虫酵母双杂交cDNA表达文库.[结果]构建的文库容量为5.78×108 CFU/mL,随机挑取23个单克隆进行菌落PCR检测,插入的双链cDNA片段大小为400bp-4000bp,平均长度在2000bp左右,文库重组率为100％,此文库可用于酵母双杂交筛选.[结论]本试验成功构建了牛源犬新孢子虫酵母双杂交cDNA文库,为筛选新孢子虫与宿主之间相互作用蛋白研究奠定了基础.
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