锚蛋白(Ankyrin)是一类富含锚蛋白重复序列功能域的蛋白,广泛存在于多种真核细胞中。主要通过介导蛋白与蛋白之间的相互作用,参与机体生长发育、物质转运、信号转导、细胞凋亡、应激反应以及细胞粘附等。前期我们通过多序列比对,发现弓形虫的多种蛋白中都含有锚蛋白重复序列结构域,迄今还未见相关研究报道。我们对TgANKP的结构域分析发现,主要由N端的信号肽、酰基辅酶A结合结构域以及C端的锚蛋白重复序列结构域构成。利用内源性基因标记技术在TgANKP的C端标记HA标签,通过间接免疫荧光(IFA)观察,发现TgANKP主要呈颗粒状分布于弓形虫的膜上。利用同源重组技术对TgANKP进行基因敲除,分别应用PCR、RT-PCR、Western blot以及IFA检测,确认TgANKP基因敲除虫株构建成功；经噬斑实验、增殖实验以及小鼠毒力实验监测,发现基因敲除虫株与ΔKu80虫株相比,其增殖能力与毒力均无显著差异。通过RT-PCR检测弓形虫酰基辅酶A结合蛋白(TgACBP)的转录水平,发现基因敲除虫株的TgACBP表达量明显上调,提示TgANKP与TgACBP在转运脂酰辅酶A方面存在一定的代偿作用,TgANKP可能通过其酰基辅酶A结合结构域参与脂肪酸的转运。利用高钾离子缓冲液刺激ΔTgANKP虫株,其增殖能力比ΔKu80显著下降,RT-PCR监测发现基因敲除虫株中应激相关因子TgAlba1以及TgAlba2的转录水平亦显著下降,提示TgANKP可能参与应激反应。本研究首次报道弓形虫富含锚蛋白重复序列蛋白ANKP参与脂肪酸转运以及应激反应,为弓形虫锚蛋白家族功能的深度解析提供有效数据。