【摘 要】
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目的：为了探究烯醇化酶对旋毛虫的感染是否具有免疫保护作用. 方法：根据GenBank中发表的旋毛虫肌幼虫ENO基因序列(AF363629.1)设计引物,以旋毛虫肌幼虫总RNA为模板,通过RT-P
【机 构】
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南京军区南京总医院比较医学科,全军实验动物科普与伦理教育基地,全国科普教育基地,江苏南京210002
【出 处】
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华东地区第13届实验动物科学学术交流会
论文部分内容阅读
目的：为了探究烯醇化酶对旋毛虫的感染是否具有免疫保护作用.
方法：根据GenBank中发表的旋毛虫肌幼虫ENO基因序列(AF363629.1)设计引物,以旋毛虫肌幼虫总RNA为模板,通过RT-PCR扩增出了肌幼虫的Tseno和基因片段.将该片段克隆到pMD19-T载体后进行序列测定和分析,将该基因亚克隆到pET32a载体中,测序验证后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后用SDS-PAGE电泳进行分析.再将Tseno克隆到真核表达质粒pVAX1中.
结果：表明该基因获得了表达,与GenBank中旋毛虫烯醇化酶基因的相似性高达99％,融合蛋白大小约为66 Ku.重组蛋白存在于包涵体中.酶切鉴定结果显示真核表达质粒pVAX1-Tseno构建成功,Western实验表明重组蛋白可被人工感染旋毛虫的大鼠血清所识别,真核质粒在小鼠体内获得了表达.
结论：该重组蛋白具有一定的反应原性,重组质粒p VAX1-Tseno构建成功.
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