香蕉条斑病毒云南分离物ORFI的原核表达及其抗血清制备

来源 :2011年度中国热带作物学会遗传育种专业委员会年会暨学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ysufeng
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  以连接在pMD-18T载体上的香蕉条斑病毒云南分离物(BSV)全基因组为模板,设计特异引物,PCR扩增获得ORF I全长序列。目的片段和表达载体pET32(b)分别经Eeo R I和Xho I双酶切后,连接构建重组质粒pET32-ORF I,将鉴定为正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得原核表达OFR I工程菌。工程菌在28℃条件下,用浓度为O.1mmol/L的IPTG诱导表达6h,离心集菌并超声波破碎,获得以含目的肽段可溶性蛋白为主的融合蛋白。将融合蛋白通过Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,得到纯度较高的融合蛋白。以此蛋白为抗原免疫家兔,获得特异抗血清,该抗血清的效价达l:100,000,Western Blot验证表明,抗血清的特异性较强。本研究为BSV的快速检测以及BSV编码蛋白的功能研究奠定了基础。
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