【摘 要】
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本文基于Light Cycler平台,利用SYBR GreenI染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性,建立了一种荧光PCR方法检测禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的方法.整个检测过程2h内可以完成,以前病毒基因组DNA为模板进行检测,病毒的最低检出浓度为106,在特异性试验中,REV有特异性的扩增曲线,而禽流感病毒和阴性对照一样,没有特异性扩增.对REV患鸡各器官组织进行了荧光PCR检测,各
【机 构】
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中国动物卫生与流行病学中心,青岛,266002;山东出入境检验检疫局,266002 中国动物卫生与
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会
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本文基于Light Cycler平台,利用SYBR GreenI染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性,建立了一种荧光PCR方法检测禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的方法.整个检测过程2h内可以完成,以前病毒基因组DNA为模板进行检测,病毒的最低检出浓度为106,在特异性试验中,REV有特异性的扩增曲线,而禽流感病毒和阴性对照一样,没有特异性扩增.对REV患鸡各器官组织进行了荧光PCR检测,各脏器病毒含量从高到低依次是肝、脾、腺胃、肾、肌胃、肺,肝脏中的病毒含量最高,肌胃中的病毒含量最少,肺中没有检测到病毒.基于SYBR GreenI的荧光PCR方法检测REV快速、敏感、特异性好,为开展REV流行病学调查,深入研究REV的传播途径机制以及病原学检测提供了一种快速、无污染的检测方法.
其他文献
通过成骨细胞(osteoblast,OB)与脾细胞共培养在体外诱导脾细胞转化为破骨细胞(Osteoclasts,OC),转化过程中分别加入5 mmol/L、3 mmol/L的钙(Calcium,Ca)或磷(Phosphorus,P)及不同浓度比例的钙磷,对照不添加钙磷因子.采用形态学观察、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色计数、扫描电镜观察象牙片吸收陷窝,研究钙磷因子作用下OC的生成和活化.结果表
为研究本实验室构建并制备的DNA疫苗-脂质体复合物在鸡体内的组织分布和安全性,经腿部肌肉分点注射及滴鼻、点眼两种免疫途径接种7日龄的非免疫健康雏鸡,利用PCR方法对疫苗在鸡体内的分布及整合进行检测研究.并通过肌肉注射和滴鼻、点眼两种途径免疫接种1日龄雏鸡;相同剂量连续免疫接种7日龄雏鸡以及5倍常规使用剂量(超大剂量)免疫接种相同日龄雏鸡,来进行免疫毒性实验研究.实验期间对实验鸡进行一般临床表现观察
本研究根据鸡传染性支气管炎病毒(IBV)793/B S1基因序列,设计和合成两对引物,以TA03株IBV病毒RNA为模板,通过RT-PCR扩增出S1蛋白基因的两个部分重叠片段,分别将其插入表达性载体pGEX-6P-1中,酶切鉴定和序列测定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western-blotting试验.结果表明表达的融合蛋白产物大小均与预期的60kD
本研究根据GenBank已公布的IBV株S1基因全序列设计一对引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1566bp,5端不含信号肽序列,3端添加了终止密码子的IBV S1基因表达片段,克隆到毕赤巴斯德表达载体pPICgK,并电击转化毕赤巴斯德酵母GS115,筛选获得整合型阳性重组菌株GS115/pPIC9K-S1 His+Muts,重组菌株在1％的甲醇中进行诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAG
本研究对1年间来自现场、怀疑IB感染的血清ELISA检测数据的血检阳性率曲线与临床相关因素之间的变化进行分析,结果表明,健康肉鸡的IB血清抗体在14-21日龄期间为低谷;2-3月份是临床肾肿病高发期,但与6-7月份的IB血清抗体阳性率高峰期不吻合;1日龄免疫ND+IB弱毒疫苗的鸡群IB血检阳性率有降低;4周龄IB病料送检比例最高,而5周龄IB血检阳性率最高.上述数据揭示了肉鸡IB发病在季节性,周龄
传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)引起的危害雏鸡的一种急性、高度接触性病毒性传染病.该病主要引起3～8周龄的鸡发病,导致死亡和引起免疫抑制,并可诱发多种鸡病或使多种疫苗免疫失败.此外,由于近年来变异株和超强毒株的流行,常使IBD免疫鸡群发病,病死率升高达80
鸡传染性法氏囊病(IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起鸡的一种急性、高度接触性传染病.IBDV属于双股RNA病毒科禽双股RNA病毒属.其基因组由两个双股RNA片段组成,分别为A片段和B片段.VP2和VP3为病毒的主要结构蛋白.VP2含量最高,其具有一个构象依赖性(不连续)的中和抗原决定簇,其诱导的中和抗体能被动地保护宿主不受IBDV感染,是IBDV的宿主保护性抗原.Bayliss等对4
近年来,鸡传染性法氏囊病不断地大面积发生,鸡群感染本病后,可导致严重的、长期的免疫抑制,并由此继发鸡新城疫的情况屡见不鲜,给养鸡业造成严重的经济损失.国内一些学者曾有报道用卵黄稀释液防治ND和IBD,但是,由于卵黄稀释液中含有大量的卵磷脂和脂肪,注射后常因难以吸收造成局部肿胀、出血等应激反应和过敏反应,而且易造成多种经蛋垂直传播病原(如沙门氏菌、大肠杆菌和支原体等)的感染.为此,瑞普(保定)生物药
本研究应用逆转录酶-聚合酶链式反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)技术,对2000～2005期间收集于广西、江苏、浙江、安徽各地的临床疑似传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)病鸡的法氏囊组织、脾脏和骨髓进行检测,对检测呈阳性的病料采用9～11天龄的鸡胚通过绒毛尿囊膜(chorio
本研究将表达鸡IFN-γ的重组鸡痘病毒(rFPV-IFN-γ)与鸡传染性法氏囊病MB43活疫苗联合接种SPF鸡,研究重组鸡IFN-γ对传染性法氏囊疫苗免疫效果的影响.结果,rFPV-IFN-γ(103PFU)和MB43活苗联合免疫组(MB43r+FPV-IFN-γ)以及重组干扰素(rIFN-γ,200U)和MB43活苗联合免疫组(MB43+rIFN-γ)在免疫后2周即可检出ELISA抗体,比MB4