【摘 要】
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从毕赤酵母(Pichia Stipitis)中克隆NADPh 依赖性的羰酰还原酶PsCR基因,构建了重组大肠杆菌E. Coli BL21(pET-22b-PsCR),该重组菌能够大量可溶地表达羰酰还原酶,通过考察诱导
【机 构】
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南京工业大学材料化学工程国家重点实验室,江苏 南京 210009
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从毕赤酵母(Pichia Stipitis)中克隆NADPh 依赖性的羰酰还原酶PsCR基因,构建了重组大肠杆菌E. Coli BL21(pET-22b-PsCR),该重组菌能够大量可溶地表达羰酰还原酶,通过考察诱导OD、诱导浓度、诱导时间和温度对酶活的影响,优化了重组大肠杆菌的表达条件,结果表明:在重组菌OD为0.6时加入终浓度为0.8mmol/L的IPTG在25℃诱导10h，比酶活可达32U/mg。利用重组菌进行不对称还原4-氯乙酰乙酸乙酯为(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的反应,在添加辅酶NADPh、葡萄糖脱氢酶及分批加入底物的情况下，产物浓度可达23.4g/L,转化率为93.7％,产物的对映体过量值为100％。表明该重组菌对4-氯乙酰乙酸乙酯有极高的活性及立体选择性。
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