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研究意义目的 前期全国耐药监测结果显示,我国接受HAART治疗人群中耐药突变率逐年升高,已达到17%.耐药突变株可在人群中广泛传播,导致后来的感染者在用药前已经对某些药物的耐受.HIV-1原发感染者耐药突变发生情况,能直接反映耐药株传播的最新动向.男男性接触者(MSM)是人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)感染的高危人群之一.近年来,MSM已成为我国HIV-1感染上升最快的人群,至2009年底,中国新发现的感染者中经同性性传播的比例已经从2007年的12.2%上升至32.5%.对MSM人群中HIV-1原发感染者耐药株的流行情况的研究,可以从一定程度上反映我国HIV-1耐药株传播的最新情况.本研究对2009-2010年辽宁省41例MSM HIV-1原发感染者进行了耐药基因型研究,对摸清当前本地区HIV-1耐药突变的发生和流行情况,临床合理用药,提高治疗效果,防止耐药毒株进一步传播具有重要意义.方法 收集辽宁省2009-2010年门诊随访的41例HIV-1原发感染者外周血,提取血浆中HIV基因组RNA,逆转录PCR (RT-PCR)和巢式PCR方法扩增蛋白酶基因全序列和逆转录酶基因1-250氨基酸编码序列,产物纯化后直接进行基因序列测定.利用Stanford HIVdb Drug Resistance Database分析耐药相关突变和耐药情况;所得序列与Los Alamos HIV sequences database中参考株及本地区慢性感染者序列排列比对,构建系统进化树分析亚型及毒株系统进化关系.结果 共检出HIV-1原发感染41例,其中抗体ELISA检测阴性,血浆HIV-1RNA检测阳性8例;抗体ELISA检测阳性,WB检测结果为阴性或不确定的13例;抗体阳转在6个月以内的为20例.获得40例原发感染者pol序列,其中CRF01_ AE亚型34例(85%),B亚型3例(7.5%),CRF07_BC亚型3例(7.5%).原发感染者耐药突变发生率10% (4/40).4例CRF01_ AE亚型感染者携带蛋白酶抑制剂主要耐药突变,其中携带M46I突变2例,M46L与L90M突变各1例,逆转录酶编码区未检出耐药相关变异.Pol序列系统进化分析发现MSM原发感染者CRF01_ AE亚型序列与此前报道的本地区CRF01_ AE亚型慢性感染者序列相混杂,共同形成两支明显的进化簇,本研究发现的4例耐药株中有3例在第一簇,1例在第二簇,此前报道的本地区CRF01 AE亚型慢性感染者耐药株也在第一簇中.图1.40例原发HIV原发感染者在系统进化树中病毒亚型分布情况(有效分析位点967bp,●代表研究对象,■代表携带针对PI的耐药突变的个体,○代表辽宁省以前发现的MSM感染者,口代表我室前期研究发现的携带针对PI耐药突变的个体).结论 辽宁省男男同性恋原发感染者中耐药发生率有所上升,耐药株可能来自本地区慢性感染者耐药株传播,有必要加强MSM人群HIV-1的耐药峪测.