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目的:探讨炎症因子关联酶(AR)通路介导大鼠脑缺血再灌注血管神经单元损伤病理机制,为其药理和临床应用提供技术基础和实验依据.
方法:将SD雄性大鼠(250±20g)随机分为缺血再灌注(MCAO)组与假手术对照组(sham),采用线栓法制作大鼠MCAO模型,缺血2h后拔栓实现再灌注,假手术组除不插线栓外,其余操作与MCAO组相同.于再灌注3h、6h、24 h取出大鼠脑组织切片.分别采用HE染色、免疫荧光染色、TTC染色、透射电镜等方法观察血管神经单元(NVU)的神经元形态学、血脑屏障超微结构改变.通过免疫印迹、免疫荧光双标、激光共聚焦等方法观察不同时间点海马CA1区及皮层区AR通路蛋白及相关炎症因子(IL-6,TNF-a)以及核转录信号因子NF-kB,AP-1表达。
结果:(1)显微形态学结果表明,AR阳性细胞表达定位在脑组织缺血损伤和坏死区胞浆位置。与Sham组相比,MCAO组皮层区、海马CA1区AR阳性细胞表达数量随再灌注时间延长明显增多,在脑组织缺血损伤和坏死区呈密集分布,向周围逐渐减少,髓质表达相对增多。(2)免疫印迹、激光共聚焦、免疫荧光等试验结果表明,AR特异性表达于NVU中血管内皮细胞,并且其与炎症因子IL-6,TNF-a以及核转录因子NF-kB,AP-1表达成正相关。
结论:AR通路介导大鼠脑缺血再灌注血管神经单元损伤,血管内皮细胞AR蛋白显著上调可能是NVLI损伤的关键病理特征之一。