哈茨木霉T66转录因子Thc6诱导玉米抗性研究

来源 :中国植物保护学会第十一次全国会员代表大会暨2013年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ahhscyf
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  本研究以哈茨木霉突变株T66为出发菌株,此菌株由T-DNA单拷贝插入且破坏基因ORF.通过反向PCR扩增该基因序列启动子及ORF框序列,结合RACE技术获得该基因全长,生物信息分析表明:该基因是一个编码328个氨基酸的C6型锌指蛋Thc6.该基因与里氏木霉中纤维素酶正调控因子Ace2同源性高达70%.将eGFP融合到Thc6蛋白C端后,荧光显微镜观察表明该蛋白定位在细胞核.通过ATMT技术获得该基因的敲除子、互补子、过表达子.生长特性试验表明,突变株与野生株在基本培养基上生长无明显差异.而同时用突变株与野生株孢子处理玉米种子,生长到5叶期挑战接种弯孢菌,过表达子处理的玉米病情指数为39.3%,野生株处理后病情指数为46.7%,敲除子处理后病情指数为64.2%.说明此基因参与诱导玉米抗病性.进一步研究木霉菌诱导玉米抗病性机理,分别测定了不同突变株处理的玉米叶片中不同时间点SA、JA通路相关基因的表达水平及SA、JA含量.结果表明,Thc6基因过表达子处理后,玉米叶片中JA通路相关基因Opr7在24h达到峰值,远高于野生株和敲除子处理的玉米叶片中Opr7表达;LC-MS测定结果表明,对应的叶片中JA含量也呈现类似的规律.结果表明,Thc6基因通过诱导玉米叶片JA的含量上升,导致玉米抗弯孢侵染能力提高.此外,敲除Thc6基因后,突变株在以纤维素粉为唯一C源的培养基因上生长量比野生株减少31.2%.通过酵母双杂交技术结合生物信息学分析,获得该基因调控的两个基因Thcb1、Thcb2基因,对于该基因在木霉菌中调控网络及诱导玉米抗性的分子机理有待进一步研究.
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