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目的：构建Ⅰ型牛疱疹病毒(BHV-1)的TK-/gE-双缺失突变株，检测其生物学功能，为治疗牛传染性鼻气管炎提供参考。方法：构建了带有EGFP表达盒的BHV-1 TK-/gE-双缺失突变株。通过southern杂交、蛋白质斑点印迹、空斑试验、MDBK细胞增殖实验等技术方法，对重组基因所构成病毒突变株的生物学特性进行鉴定。结果：Southern杂交及蛋白斑点印迹表明，课题组成功构建了带有EGFP表达盒的双缺失突变株；该突变株具有与野生株相当的繁殖力，但TK-/gE-成功缺失，毒力大幅减弱；BHV-1 TK-/gE-遗传稳定，不会返强。结论：本项目组成功构建了Ⅰ型牛疱疹病毒(BHV-1)的TK-/gE-双缺失突变株，该缺失株具有良好的安全性和稳定性，为该突变株进一步作为生物安全疫苗和多价病毒载体提供了依据，为预防和治疗牛传染性鼻气管炎提供了技术支持。