酶联免疫吸附分析指通过酶标抗体与吸附在固相载体上的抗原或抗体-抗原复合物发生特异性结合,对待测物进行检测的分析方法,它结合了酶催化反应的高效性和抗原-抗体反应的特异性,极大地提高了检测的灵敏度。比色免疫分析可通过肉眼快速定性判断,也可以通过普通光度计定量分析,无需昂贵的大型仪器,检测耗时短门槛低,已被广泛应用于诸多领域[1-3]。在传统的酶联免疫吸附分析中,酶催化底物发生氧化还原反应并显色,底物成本高,产物稳定性差。本工作基于金属离子螯合物随离子价态改变而颜色发生改变的现象和碱性磷酸酶催化的信号放大构建了两种新型比色免疫分析方法。具体地:碱性磷酸酶催化抗坏血酸酯水解成还原性抗坏血酸,然后将显色液中的金属离子(如Fe³⁺和Cu²⁺)还原成低价态,进而产生螯合物颜色的变化。在最优实验条件下,本方法检测碱性磷酸酶的线性范围为0.001-0.5U mL^-1,最低检测限达到0.0001 U mL^-1。本工作进一步以兔IgG为模型目标物,构建了三明治夹心免疫分析方法,以期对该新方法的可行性和性能进行验证。实验结果显示,在模拟血清样品中所构建的新型比色分析方法的线性检测范围为0.1 ng mL^-1-25 ng mL^-1,最低检出限为0.05 ng mL^-1,足以满足绝大部分生物分析和医学诊断领域的应用。本方法以金属离子价态变化引起的颜色改变进行显色,与传统酶联免疫分析相比具有检测灵敏度高、试剂成本低、显色产物稳定性好等优点。另外,本方法可直接使用传统酶联免疫吸附分析法所用商品化酶标抗体,避免了复杂、耗时、低效率的额外修饰,保证了检测的兼容性、便捷性和可靠性。