【摘 要】
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根据迟缓爱德华氏菌16S rRNA保守区域基因序列,设计引物和TaqMan荧光探针,通过对反应条件进行优化,建立了用于检测迟缓爱德华氏菌的荧光定量聚合酶链式反应(Fluorescentquant
【机 构】
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上海海洋大学水产与生命学院; 中国水产科学研究院黄海水产研究所;
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根据迟缓爱德华氏菌16S rRNA保守区域基因序列,设计引物和TaqMan荧光探针,通过对反应条件进行优化,建立了用于检测迟缓爱德华氏菌的荧光定量聚合酶链式反应(Fluorescentquantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)诊断方法。通过所构建的16S rRNA质粒标准品核酸拷贝数(C/5,x)的对数值与其对应Ct值(y)的相关性,分析得到FQ-PCR的标准曲线:y=-3.2798x+39.635(R~2=0.9989)。以标准质粒为模板,进行灵敏度实验及批内与批间分析,结果表明其检测极限可达到50copies,较常规PCR高100倍,在5x10~9～5x10~0 copies/ul范围内批内与批间变异系数(CV)分别为0.20～2.10%、0.06～1.78%,证实其重复性较好。特异性检测中该方法与6种海水弧菌均无交叉反应。研究结果表明,该方法灵敏,特异、准确、重复性良好且能实现迟缓爱德华氏菌的定量检测,对迟缓爱德华氏菌的临床检测和疫情监测具有重要意义。
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