【摘 要】
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利用RT-PCR技术扩增获得了H5亚型禽流感病毒QS株的NS1基因,ORF长度为678bp.并成功构建了重组表达载体pET-NS1,将其转化BL21(DE3),刚终浓度1mmol/L的IPTG诱导表达5h,经15﹪的SDS
【机 构】
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河南农业大学禽病研究所,郑州,450002
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会
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利用RT-PCR技术扩增获得了H5亚型禽流感病毒QS株的NS1基因,ORF长度为678bp.并成功构建了重组表达载体pET-NS1,将其转化BL21(DE3),刚终浓度1mmol/L的IPTG诱导表达5h,经15﹪的SDS-PAGE分析表明,诱导表达出了分子量大约为28KD的NS1融合蛋白,且以包涵体的形式存在.NS1融合蛋白经变性复性,获得纯度较高的NSI蛋白,并以此为抗原,建立了检测抗NS1蛋白抗体的ELISA(NS1-ELISA)方法.最佳包被浓度为2.5μg/mL,血清的最佳稀释倍数为1:200,酶标二抗的最佳工作稀释度为1:5000.重组NS1蛋白只与AIV感染的血清反应,而不与ND、IB、IBD、EDS76的阳性血清反应.分别检测H9N2、H5N2和H5N1亚型灭活疫苗免疫的血清,各5份,其平均OD490值分别为0.225、0.210和0.205,均为阴性,而对H9N2、H5N2和H5N1亚型活毒感染10d～15d的血清进行检测,各5份,其平均OD490值分别为0.592、0.623和0.619,均为阳性.因此,NS1蛋白区能特异地区分野毒感染和灭活疫苗免疫鸡群,可作为一种鉴别诊断标记,但不能区分亚型,具有A型特异性.NS1-ELISA方法的初步应用,不仅为生产提供了一种快速、特异、敏感的鉴别诊断方法,为进一步组装成试剂盒奠定了基础,也为禽流感的早期诊断,适时监控和净化提供了行之有效的方法.
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