[目的]本实验利用8-12周龄的雄性黄羽鸡肝细胞作为实验对象,建立成年鸡肝细胞原代培养的体外模型,为以后利用肝原代细胞模型开展其他实验研究奠定基础.[方法]以改进的胶原酶二步灌流法分离鸡肝细胞,使用胶原酶对鸡肝脏进行消化；利用台盼蓝染色法对分离纯化后的肝细胞染色,1 min后在血细胞计数板上进行细胞计数,计算出获得的肝细胞产量和肝细胞实时存活率；用四种不同的细胞基础培养基DMEM培养基、1640培养基、Williamsmedium E培养基和Leibovitzs L-15(L-15)培养基对鸡肝细胞进行体外培养,观察在不同的培养基中培养后肝细胞的生长情况；利用MTT法绘制生长曲线,检测细胞存活和生长,以便研究肝细胞的生长周期.[结果]通过结扎肝脏周围血管,将肝脏完整取出后用2％浓度的双抗冲洗浸泡肝脏,不仅缩短了操作时间,还避免了原位灌流时鸡自身可能给肝脏带来的污染,而且肝内血液一直保持抗凝状态,灌流结束后,肝脏呈土黄色,肝包膜内呈糊状；通过细胞计数,计算出从每个肝脏获得的肝细胞总量为(9.2±0.2)×108个,以台盼蓝拒染实验得到肝细胞实时存活率为93％±1％.Williamsmedium E培养基贴壁最好,DMEM和L-15次之,1640略差,在长期培养过程中DMEM培养基中细胞稳定周期长,可长期培养2-3周,在DMEM培养条件下,鸡肝细胞体外培养8日内的OD值显示,原代培养3-5d,细胞数量大且稳定,随后有所降低.[结论]改进的二步离体灌流法操作简便,获得的细胞活率高达90％以上；用含胰岛素、转铁蛋白、双抗和10％胎牛血清的DMEM基础培养液体外培养鸡肝细胞,更经济,效果更好,贴壁培养时可见到肝细胞较为明显的分化过程；生长曲线显示3-5d时细胞稳定.