【摘 要】
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蜡样芽胞杆菌引发的食物中毒包括呕吐和腹泻两种类型,不仅对畜牧业造成严重的经济损失,对人类的健康也存在着安全隐患.非溶血型肠毒素(non haemolytic enterotoxin,Nhe)
【机 构】
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中国农业大学动物医学院,国家兽药安全评价中心 北京,海淀,100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨
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蜡样芽胞杆菌引发的食物中毒包括呕吐和腹泻两种类型,不仅对畜牧业造成严重的经济损失,对人类的健康也存在着安全隐患.非溶血型肠毒素(non haemolytic enterotoxin,Nhe)是蜡样芽胞杆菌致腹泻的毒力因子.Nhe是一种包含三种组分(NheA (41.0 kDa),NheB (39.8 kDa), and NheC (36.5 kDa)的毒素,它对细胞膜有损伤作用,但是Nhe对细胞内的毒性作用还不清楚,其致腹泻及肠炎的机制还不完善.[目的]为了研究Nhe对Vero细胞的胞内毒性机制,[方法]通过WST-1细胞毒性试验发现不同稀释度下的Nhe对Vero等上皮类细胞毒性较大,ICS0达到1∶2000的稀释度.DNA Ladder实验结果表明1∶100和1∶500稀释度的Nhe使Vero细胞DNA片段化；Hoechst 33342免疫荧光实验发现毒素诱导的Vero细胞核有凋亡所特有的致密浓染；流式细胞术(Annexin-V和PI染色)发现1∶500稀释度下的Nhe诱导Vero细胞的凋亡率达到43.3％,而无毒素作用的凋亡阴性对照以及0.1 μM星形孢菌素(Staurosporine,STAU)的凋亡阳性对照的凋亡率分别是5.73％和33.3％；与此同时,发现ZVAD-fmk(caspase酶抑制剂)能减少Nhe诱导的细胞凋亡,表明Nhe诱导的Vero细胞凋亡可能通过是caspase依赖途径.通过Western blot分析发现凋亡蛋白caspase-3,caspase-8,和caspase-9均随Nhe浓度的提高而不同程度的激活,进一步证实Nhe诱导的Vero细胞凋亡是通过外源性和内源性(线粒体依赖)凋亡通路同时激活的.[结论]综上,Nhe诱导Vero细胞凋亡通过内源性和外源性的凋亡途径,阐明了Nhe致细胞毒性的机制,进一步揭示蜡样芽胞杆菌致腹泻的病理机制,从而为临床用药提供理论依据.
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