【摘 要】
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CYP2J酶主要参与机体内源性物质代谢,尤其是对花生四烯酸和亚油酸代谢发挥着重要作用。本实验为蛋白层面深入研究双峰驼CYP2J酶提供特异性抗体而构建原核表达载体,从双峰
【机 构】
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内蒙古农业大学兽医学院,农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特010018
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨
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CYP2J酶主要参与机体内源性物质代谢,尤其是对花生四烯酸和亚油酸代谢发挥着重要作用。本实验为蛋白层面深入研究双峰驼CYP2J酶提供特异性抗体而构建原核表达载体,从双峰驼肾脏组织提取RNA,反转录后PCR扩增出双峰驼CYP2J基因,胶回收纯化后,进行TA克隆,连接pMD-18T质粒并转化大肠杆菌DH5α的感受态细胞中,提取质粒进行HindⅢ和KpnⅠ双酶切和PCR鉴定；并借助上述内切酶双酶切重组质粒pMD 18-T-CYP2J后,连接于经同样双酶切的原核表达载体pET-32a,转化于大肠杆菌DH5α细胞中并经HindⅢ和KpnⅠ双酶切、PCR鉴定及测序鉴定重组质粒。结果表明,在重组质粒pMD 18-T-CYP2J和pET-32a-CYP2J双酶切电泳图中均能显示约1500bp的特异性目的条带及两种质粒的特异性条带；以2种重组质粒为模板进行PCR扩增后电泳图均在约1500bp处显示CYP2J特异性条带；并且将测序结果与Genbank中公布的双峰驼CYP2J预测序列进行比对,其相似度为99％。成功构建了双峰驼CYP2J基因原核表达载体pET-32a-CYP2J,为该基因的高效原核表达和蛋白层面的研究奠定了基础。
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