论文部分内容阅读
我国的竹类资源丰富,素有“竹子王国”之称。竹叶资源未被充分开发利用,而竹叶提取物含有丰富的次生代谢物,如黄酮类物质、酚酸类物质、氨基酸、蛋白质及挥发性成分等,它还有抗氧化、抗衰老、抗辐射等功效。为了推动我国竹叶资源,特别是地被竹叶资源的综合利用,本文以竹叶提取物抗氧化活性和对酪氨酸酶活性的影响为评价指标,筛选出其具有高活性的竹种,研究其抑制酪氨酸酶活性最强的提取工艺条件,并对影响酪氨酸酶活性的有效部位进行筛选,初步研究其功能成分及其生物活性。旨在为地被竹叶资源的开发利用提供一定的科学依据,也为酪氨酸酶抑制剂的开发提供参考。主要的研究结果如下:(1)竹叶提取物抗氧化活性与对酪氨酸酶活性的影响在相同的条件下,研究了5个(种)地被竹叶与淡竹叶提取物抗氧化活性及对酪氨酸酶活性的影响,发现5个(种)地被竹叶与淡竹叶提取物均有一定的抗氧化活性和抑制酪氨酸酶活性的作用。其中鹅毛竹叶提取物不管是抗氧化活性还是对酪氨酸酶活性的影响都显示出了很强的活性,其清除DPPH自由基和ABTS自由基的IC50值分别为32.33μg/mL,5.69μg/mL;铁还原能力即FRAP值为(585.00±1.43)μg/mL;抑制酪氨酸酶活性的IC50值为5.59mg/mL。(2)鹅毛竹叶提取工艺优化提取物浓度为4mg/mL时,在单因素实验的基础上,以酪氨酸酶抑制率为指标,采用响应面法对鹅毛竹叶提取物抑制酪氨酸酶活性物质提取工艺条件进行优化。得到的提取最佳工艺条件为乙醇浓度70%,料液比1:16,提取温度80℃,提取时间1h,在此工艺条件下酪氨酸酶的抑制率达到最大值45.35%。与理论预测值基本相符。(3)筛选提取物抗氧化活性与抑制酪氨酸酶活性最高的部位利用最佳提取工艺条件获得鹅毛竹叶提取物,并用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进一步萃取,得到各极相的萃取物。采用DPPH法、ABTS法及铁还原能力评价各级相的抗氧化活性,得到乙酸乙酯相对DPPH自由基和ABTS自由基的清除能力及铁还原能力是最强的,其清除DPPH自由基和ABTS自由基的IC50值分别为(28.74±0.56)ug/ml、(10.10±0.39)ug/ml,铁还原能力即FRAP值为(3886.43±7.14)ug/ml;除石油醚相没有酶抑制活性外,乙酸乙酯相、正丁醇相和水相对酪氨酸酶活性均有一定的抑制作用,其中乙酸乙酯相对酪氨酸酶活性的影响最大,其抑制酪氨酸酶活性的IC50值为3.29mg/mL,其酶抑制类型为可逆的竞争性抑制,抑制常数为Ki=27.49mg/mL。(4)有效部位成分的初步探索及其生物活性测定采用HPLC外标法对有效部位乙酸乙酯相中的成分进行分析,初步分析出,乙酸乙酯相中存在绿原酸、咖啡酸、异荭草苷、对香豆酸、山奈酚及苜蓿素成分。其中绿原酸、咖啡酸、异荭草苷及山奈酚具有清除DPPH自由基的能力,其IC50值依次为5.31μg/mL、6.72μg/mL、11.66μg/mL、7.29μg/mL;绿原酸、咖啡酸、异荭草苷、对香豆酸及苜蓿素具有清除ABTS自由基的能力,其IC50值分别为1.56μg/mL、4.72μg/mL、7.39μg/mL、1.11μg/mL、4.62μg/mL;铁还原能力较强的有绿原酸、咖啡酸及山奈酚,其FRAP值分别为572.00μg/mL、259.14μg/mL、362.00μg/mL。绿原酸、咖啡酸和山奈酚具有抑制酪氨酸酶活性的作用,其IC50值分别为1.46mg/mL、4.47mg/mL、0.78mg/mL。