局部使用作用于肿瘤坏死因子α的反义寡核苷酸对实验性小鼠病毒性脉络膜视网膜炎的影响

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目的:观察局部使用作用于肿瘤坏死因子α的反义寡核苷酸对实验性小鼠病毒性脉络视网膜炎病理过程的影响。方法:将50只BALB/C小鼠随机分为两组,每组25只。将单纯疱疹病毒—Ⅰ型注入所有小鼠右眼(注射眼)前房内,建立Von Szily模型。第一组为实验组,分别于单纯疱疹病毒感染前1天,感染后1天,感染后4天,将异硫氰酸荧光素标记的作用于TNF-a的反义寡核苷酸2uM(50ul磷酸盐缓冲剂)注射于感染小鼠的左眼(非注射眼)球结膜下;第二组为空白对照组,分别于相同时间段内将50ul磷酸盐缓冲剂注射于感染小鼠左眼球结膜下。观察两组小鼠眼部的炎症改变并根据有无前房炎症反应、瞳孔和虹膜血管扩张、白内障形成、玻璃体混浊行临床评分,于病毒感染后10天处死小鼠,观察其组织化学变化,免疫组织化学改变。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定小鼠脉络膜视网膜的TNF-a含量。结果:感染后,两组小鼠右眼(注射眼)均表现为急性前葡萄膜炎改变,实验组小鼠左眼(非注射眼)炎症反应临床评分明显低于对照组。组织学观察,空白对照组有12只小鼠左眼表现为不同程度的坏死性脉络膜视网膜炎,而实验组只有2只小鼠左眼表现为轻至中度的脉络膜视网膜炎,实验组与对照组视网膜、脉络膜和睫状体部位炎性细胞计数差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织学化改变:空白对照组小鼠脉络膜和视网膜可见较多数目CD3阳性细胞,实验组脉络膜和视网膜只发现少量CD3阳性细胞。实验组与对照组脉络膜和视网膜CD3阳性细胞数目相比差异具有统计学意义。(P<0.05)。空白对照组小鼠脉络膜和视网膜可见较多数目MMP-9阳性细胞,实验组脉络膜和视网膜只发现少量MMP-9阳性细胞,实验组与对照组脉络膜和视网膜MMP-9阳性细胞数目相比差异具有统计学意义(P<0.05)。ELISA测定结果:实验组脉络膜视网膜TNF-α含量为(60±1.25)pg,空白对照组脉络膜视网膜TNF-α含量为(305±1.03)pg,实验组与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:局部使用作用于TNF-α的反义寡核苷酸能明显减轻病毒性脉络膜视网膜炎的炎症反应,降低小鼠眼内细胞因子TNF-α的含量,这为反义技术在临床上用于葡萄膜炎的治疗提供了有益的探索。
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