本论文的主要研究内容包括两个方面：1．建立了猕猴桃高频再生体系，通过农杆菌转化法将拟南芥Na~+／H~+逆向转运蛋白基因AtNHXl导入猕猴桃基因组，初步筛选得到转基因植株。2．通过电子克隆方法得到一条玉米Na~+／H~+逆向转运蛋白的cDNA序列。一、猕猴桃组织培养和遗传转化猕猴桃是一种新兴果树，起源于我国，因风味独特，营养价值高，同时具有医疗效果，所以深受人们喜爱。近年来，随着生活水平的提高和消费结构的变化，人们对优质猕猴桃的需求量越来越大。我国猕猴桃种类极其丰富，可以为培育优质猕猴桃新品种提供种质资源，但猕猴桃属植物雌雄异株，遗传背景复杂，传统育种方法存在周期长，效率低等问题。现代生物技术的兴起为猕猴桃育种开辟了一条新的途径，随着猕猴桃组织培养体系的建立，通过遗传转化方法导入抗性基因已成为猕猴桃育种的重要手段。本实验选用全国栽种面积最大、产量最高的美味猕猴桃作为研究对象，建立了猕猴桃的高频再生体系。在此基础上，采用农杆菌转化法将拟南芥AtNHXl基因转入猕猴桃，并对转化植株做了PCR鉴定。具体工作如下：(1)猕猴桃高频再生体系的建立：实验中以MS培养基为基本培养基，猕猴桃茎及叶片为外植体，研究了2，4-D、6-BA和NAA在美味猕猴桃愈伤组织形成及分化过程中的作用。方差分析表明6-BA可以促进愈伤组织形成，6-BA和NAA配合能明显提高愈伤组织的诱导和分化频率，而2，4-D对愈伤组织形成有抑制作用。附加2mg／L 6-BA、1mg／L NAA和600mg／L水解酪蛋白的MS培养基是愈伤组织诱导和分化的最佳培养基。在该培养基上，以再生的无菌苗为起始材料，一个月后叶盘的再生频率达到100％，每个叶盘平均产生9.33个再生芽，其中23.21％的芽高度超过0.5cm。附加0.4mg／L IBA的1／2MS培养基为最佳的生根培养基，在该培养基上猕猴桃再生植株生根最多，且形成的愈伤组织最少。(2)农杆菌介导的猕猴桃遗传转化：用携带pHZXl质粒的农杆菌菌株LBA4404侵染猕猴桃愈伤组织、茎切段和叶圆盘，在附加20mg／L卡那霉素的分化培养基上得到15株抗性再生植株，其中7株在PCR检测时可以扩增产生AtNHXl基因片段。二、玉米Na~+／H~+逆向转运蛋白基因的电子克隆基因的电子克隆是在人类基因组计划和EST(expressed sequence tag)发展的基础上，迅速兴起的一种新的基因克隆方法，具有投入少、速度快、技术要求低和针对性强等优点，该方法最初主要用于动物基因的分离，尤其是人类、小鼠和斑马鱼基因等。近年来，随着植物EST数量的迅速增加，通过电子克隆技术也已经分离了很多植物基因。本工作以水稻Na~+／H~+逆向转运蛋白基因(GenBank登录号，AY270037)序列作为查询探针，检索玉米EST数据库，经拼接最终得到一个长度为2055kb的cDNA序列，包含完整的OFR，编码539个氨基酸，与芦苇、獐茅、水稻和大麦的Na~+／H~+逆向转运蛋白的氨基酸序列相似性大于90％。RT-PCR验证工作正在进行之中。