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星豹蛛是农业害虫的重要捕食性天敌,在农林生物防治中发挥极其重要的作用,是一种非常有利用价值的天敌。各种杀虫剂的连年大量使用不仅使害虫产生了“3R”现象,也对害虫天敌星豹蛛造成了严重危害,本文从分子生物学角度研究其抗药性机制。采用转录组测序技术对星豹蛛进行转录组测序,以扩展该物种的基因信息资源,鉴定星豹蛛细胞色素P450基因,并对溴氰菊酯LC10、LC30、LC50处理下的P450基因进行差异表达分析,初步筛选与抗药性相关的星豹蛛细胞色素P450基因,为研发抗性主导酶系的抑制剂提供理论基础。本研究所获得的主要研究成果如下:1.由于星豹蛛的生活史较长,成蛛的寿命在165天左右,因此本试验采用生物测定的方法获取测序材料。本试验用溴氰菊酯对星豹蛛进行室内毒力测定,结果显示LC10的浓度为5.151mg·L-1、LC30的浓度为8.619 mg·L-1、LC50的浓度为12.311 mg·L-1。与高效氯氟氰菊酯及阿维菌素的LC50(3.2 mg·L-1,7.51 mg·L-1)相比,溴氰菊酯的杀虫毒力弱,更容易产生抗药性。故使用溴氰菊酯的LC10、LC30、LC50这三个浓度加对照处理性成熟的星豹蛛进行转录组测序。2.通过Illumina Hiseq2000平台测序,总计产出19,468,934,460nt数据。组装结果总Unigene 为 68,410 个,总长 74,731,570nt,平均长度 1,092nt,N50 达到 2,048nt。Q20 高于98%,无法确定的碱基数与总碱基数的比例为0.01%,GC含量平均达39.02%,Conting和Unigene的N50平均值分别为419nt和1,500nt。Unigene功能注释,注释到NR,NT,Swiss-Prot,KEGG,COG,GO库的Unigene分别是24,713个,10,365 个,21,300个,18,701 个,10,225 个,12,255 个,所有注释上的 Unigene 是 26,814 个。共 28,055 个 CDS,24,688个能够在蛋白库比对,预测出的CDS有3,367个。SSR共10,869个。3.在星豹蛛转录组测序的分子基础上,采用手动搜索的方法在数据库中查找,并使用ORF finder在线翻译Unigene,通过保守的氨基酸序列对星豹蛛细胞色素P450进行鉴定,同时使用MEGA5软件中的Neighbor-joining(NJ)法构建系统发育树对鉴定的细胞色素P450进行分类。共鉴定出66条星豹蛛细胞色素P450基因,有23条属于CYP2家族,CYP3家族有11条,CYP4有17条,其余15条分属于其它家族(CYP10、CYP12、CYP49等)。将P450基因比对到KEGG数据库发现,共涉及13条代谢通路,且部分是与解毒代谢相关的通路。4.将筛选出的星豹蛛细胞色素P450基因进行各处理下差异表达倍数比较,差异表达倍数的计算使用FPKM法,共筛选出10个P450差异表达基因,并将筛选出的10个P450差异表达基因进行GO显著富集和KEGG显著富集分析,结果显示有5个星豹蛛细胞色素P450基因在GO和KEGG均显著富集,且参与的GOterm和KEGG通路大多进行某种代谢活动,皆与外源物质的代谢相关,故最终筛选5个星豹蛛细胞色素P450差异表达基因,预测这5个基因是与星豹蛛抗药性相关的基因。