目的运用不同方法观察人羊膜为载体体外培养的兔同种异体角膜缘干细胞膜片移植术后羊膜的变化，为此种临床治疗方法提供参考。方法1、眼部碱烧伤动物模型的建立及评价：1）模型建立：选取健康新西兰白兔35只，以右眼为造模眼，左眼为正常对照眼，剪除第三眼睑，将浸有1mol/LNaOH溶液的环形滤纸片贴于角膜缘30s，同时在结膜囊内滴入50μl1%NaOH溶液，大量生理盐水冲洗结膜囊5min，结膜囊涂0.3%氧氟沙星眼膏qn，定期裂隙灯观察、照相。2）模型评价：模型眼表稳定后行裂隙灯观察并评分、RT-OCT检查、活体共聚焦显微镜检查、印迹细胞学查角膜及结膜杯状细胞、病理组织学检查、泪液分泌试验。2、实施羊膜为载体培养的异体角膜缘干细胞膜片移植手术和术后动态随访观察羊膜的变化：1）根据临床评分标准选取6-9分的模型眼21眼实施手术，术后缝合睑裂，局部规范用药。2）术后1d、7d、0.5月、1月、2月、3月6个时间点行裂隙灯观察，术后1月、2月、3月行RTVue傅立叶OCT、活体激光共焦显微镜检查，不同时间点分别取材3眼（治愈组3眼、失败组3眼）行角膜病理组织切片HE染色，在光学显微镜下观察照相。结果一、眼部碱烧伤动物模型的评价造模后1.5月±10d时，根据化学伤临床评分标准，35眼中6-9分28眼，占80%，4眼临床评分＜6分，1眼＞10分，1眼角膜穿孔，1眼眼内炎，最终眼球萎缩。裂隙灯检查示角膜及结膜炎症趋于稳定，角膜混浊，大量新生血管长入角膜，深度可达角膜浅基质，角膜不同程度结膜化，虹膜纹理视不清，合并轻微睑球粘连，荧光素钠染色角膜及结膜均呈阴性；RT-OCT检查可见角膜增厚明显，扫描难以穿透，可见角膜基质新生血管影；活体共焦显微镜检查可见上皮细胞排列紊乱，大量炎细胞浸润，不见正常上皮细胞结构，角膜浅基质大量新生血管，管内红细胞流动，神经组织破坏严重，断裂，基质瘢痕，纤维排列紊乱，炎细胞浸润明显，难以扫描到内皮细胞层；印迹细胞学查角膜及结膜杯状细胞见角膜上皮细胞形态不规则，角膜上皮中可见杯状细胞，结膜上皮中杯状细胞数量较正常减少；角膜组织病理切片HE染色见上皮层细胞排列紊乱，基底膜欠平滑，浅基质中大量新生血管，管腔内见红细胞，基质增厚，纤维排列紊乱，大量炎细胞浸润，深层基质结构尚正常，内皮面未见明显变化；泪液分泌实验结果显示模型眼泪液分泌减少，与对照眼比较差异有统计学意义，P<0.05。二、移植术后羊膜的变化1、根据术后效果分为两类：治愈组和失败组，术后1月时，21眼中治愈12眼，失败9眼，2、3月时治愈组中分别有2眼、1眼发生失败。治愈组眼表稳定，角膜尚透明，虹膜纹理尚清，无新生血管或仅角膜缘缘内2mm少量新生血管长入；失败组眼表再次新生血管化，角膜混浊，虹膜纹理视不清。手术效果不同，羊膜的变化不同。2、裂隙灯观察：术后第1d，羊膜在位，可见羊膜透明度较差，呈灰白色，虹膜纹理视不清，荧光素钠染色阴性，第7d羊膜在位，较前变薄，混浊变淡，透明度略提高，0.5月时羊膜未见溶解脱落。治愈组，1月时，羊膜在位，尚透明，裂隙下厚度较薄，虹膜纹理清晰，角膜缘<2mm内可见少量新生血管；2月时，羊膜隐约在位，裂隙下不见典型羊膜，难以判断是否为羊膜；3月时，眼表稳定，角膜上皮化，保持透明，角膜缘处无明显新生血管，裂隙下辨别不清是否羊膜在位，荧光素钠染色均呈阴性；失败组则在术后1月时出现新生血管长入角膜周边，≤1/2象限，欠透明，上皮下方见毛玻璃样灰白色混浊，似为羊膜存在；2月时，新生血管位于角膜周边，>1/2象限，裂隙下羊膜视不清，局部区域角膜上皮下毛玻璃样结构消失；观察到3月时，眼表再次新生血管化，全角膜可见新生血管生长，羊膜视不清，可见少量小块状毛玻璃样混浊，但荧光素钠染色均呈阴性。3、RT-OCT检查：治愈组，1月时羊膜表现为角膜上皮下连续的反光增强的弧形结构，与上皮层、基质层分界清楚，厚度均匀，约36±5.4μm；2月时仍可见角膜上皮下连续的反光增强的弧形结构，厚度为25±3.4μm；3月时，羊膜样反光增强的弧形结构存在，厚度为15±1.9μm。失败组则1月时羊膜在位，表现为为角膜上皮下可见连续的反光增强的弧形结构，厚度均匀，为38±5.8μm，下方角膜基质水肿著；2月时羊膜层，羊膜层变薄，尚连续，约27±3.7μm，羊膜下可见新生血管影；3月时就羊膜样结构不连续，新生血管影增多，羊膜厚度约9±1.7μm。不同时间点两组间比较，3月时，差异有统计学意义，P<0.05。4、活体激光共焦显微镜观察：治愈组1月时观察到上皮层下方的羊膜组织呈现均质、反光增强的无细胞结构，周围少量炎细胞浸润；2月时，羊膜组织的反光逐渐减弱，周围偶见炎细胞浸润，未见新生血管；3月时仍可观察到呈现均质、反光增强的无细胞结构，无炎细胞浸润，无新生血管长入，可观察到内皮细胞层；失败组1月时观察到上皮层下方的羊膜组织呈现均质、反光增强的无细胞结构，周围见大量炎细胞；2月时见羊膜周围新生血管长入，大量炎细胞浸润；3月时仅局部找到反光增强的无细胞羊膜结构，羊膜周围新生血管数量较前增多，炎细胞浸润明显，不能观察到到内皮细胞层。5、病理切片HE染色：治愈组1月时羊膜结构连续完整，与下方角膜基质连接疏松，周围可见少量炎细胞浸润；2月时羊膜与下方角膜基质连接较前紧密，厚度变薄，周围少量炎细胞浸润；3月时，羊膜整体变薄，结构连续，羊膜周围偶见少量炎症细胞浸润，与下方角膜基质连接紧密，羊膜下角膜基质结构排列整齐。失败组1月时羊膜结构连续完整，与下方角膜基质连接疏松，羊膜周围大量炎细胞浸润，可见羊膜下细小新生血管；2月时，羊膜变薄，结构尚连续，炎细胞浸润明显，大量新生血管，角膜浅基质瘢痕；3月时可见羊膜组织不连续，整体变薄明显，部分残留，其周围大量炎症细胞浸润，角膜浅基质层大量粗大新生血管，瘢痕组织明显。结论1、环形滤纸片浸润碱液烧伤新西兰白兔角膜缘组织，同时结膜囊滴入低浓度碱液可以成功构建角膜缘干细胞缺乏的眼部碱烧伤动物模型。2、羊膜为载体培养的异体角膜缘干细胞膜片移植术后羊膜的变化与其周围组织环境密切相关。手术效果好，羊膜作为稳定的载体可以较长时间的存在于角膜基质上；若手术失败，羊膜会逐渐在炎细胞及新生血管的作用下逐渐消失。