目的:溃疡性结肠炎是一种特发的慢性肠道炎症性疾病,病理机制尚未完全清楚,属中医“痢疾”范畴。因其反复发作和难治的特性,已成为世界公认的医学难题,肠粘膜屏障受损是其病理特征之一。小檗碱是从治疗“痢疾”方剂中的高频药物黄连中提取的一种异喹啉生物碱,具有抗菌、调节代谢、抗肿瘤、抗心律失常等广泛的药理作用。多项研究表明小檗碱是一种有前景的治疗溃疡性结肠炎的药物,然而其作用机制仍需进一步明确,本研究拟探讨小檗碱对DSS诱导的结肠炎小鼠肠粘膜屏障的保护作用及其改善实验性结肠炎的机制。方法:使用3%的DSS构建小鼠模型,根据小鼠的体重变化、疾病活动指数、结肠长度变化及组织病理学变化评估结肠炎的严重程度;使用TNF-α诱导Caco-2细胞损伤构建体外模型,使用组织病理切片染色、PCR、western blot、肠道通透性检测、流式细胞术、多因子检测等方式在体内外模型中检测小檗碱对肠粘膜屏障的保护作用;使用菌群清除及粪菌移植的实验探究小檗碱的药效途径;使用蛋白质组学技术明确各组小鼠结肠组织蛋白质谱的变化并筛选药物作用相关通路;在体内外使用抑制剂或si RNA通路阻断的方式探究小檗碱保护结肠炎所依赖的信号通路。结果:小檗碱能抑制DSS诱导的结肠炎小鼠体重下降及结肠短缩,降低疾病活动指数,改善结肠组织病理变化以缓解肠道炎症。并且,小檗碱能增加肠道菌群丰度,促进有益菌而抑制有害菌的表达以调控生物屏障,来自小檗碱干预小鼠的粪便上清液对Caco-2的损伤作用明显小于模型组;同时,其能增加粘液的表达重建模型小鼠的化学屏障,降低结肠组织通透性,从蛋白水平及m RNA水平促进紧密连接相关蛋白Occludin及ZO-1在体内外模型的表达以修复上皮屏障;针对免疫屏障,小檗碱能调控肠粘膜固有层固有淋巴细胞的表达及ILC1/ILC3、Th17/Treg细胞的平衡,抑制促炎细胞因子并促进抑炎因子的表达。然而,肠道菌群清除消除了小檗碱的治疗作用,小檗碱干预小鼠来源的粪便移植能改善菌群清除模型小鼠的结肠炎。蛋白质组学研究发现小檗碱干预改变了模型小鼠的结肠蛋白质谱,差异蛋白富集在Wnt/β-catenin通路,而Wnt通路抑制剂FH535能在体内抑制小檗碱的抗结肠炎作用,Wnt的si RNA能在体外抑制小檗碱对Caco-2细胞的保护作用。结论:小檗碱能够改善DSS诱导结肠炎小鼠的肠粘膜屏障结构及功能损伤,并以菌群依赖及Wnt/β-catenin通路依赖的方式发挥其对结肠炎的保护作用。这些发现也证明了小檗碱可以作为溃疡性结肠炎预防和治疗中一种潜在的肠道菌群调节剂和粘膜屏障保护剂。