miRNA-145-3p/5p与早发型子痫前期相关性的研究

来源 :华中科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:woyunwohun
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
【研究背景】早发型子痫前期(Early Onset Preeclampsia,EO-PE)是一种严重威胁母儿健康的妊娠期并发症,滋养细胞侵袭不足导致的胎盘重塑不良是其发病的核心环节。有研究报道,微小RNA(micro RNA,miRNA)介导的转录后调控网络广泛参与子痫前期发病的多个环节,其中,miRNA-145-3p/5p可能通过调控滋养细胞功能和上皮间质转化通路(Epithelial Mesenchymal Transition,EMT)参与EO-PE发病,但证据十分有限。【研究目的】鉴定与EO-PE相关的miRNA调控网络;筛选可能在EO-PE发病中发挥调控作用的关键miRNA(miRNA-145-3p/5p)并初步确定其机制,为揭示EO-PE的发病机制提供新的视角。【研究方法】1.加权基因共表达网络分析结合差异分析鉴定EO-PE胎盘中差异表达的核心基因及miRNA分子,通过Target Scan、miRDB和miRTar Base数据库构建EO-PE胎盘中的miRNA调控网络并鉴定潜在的核心miRNA(miRNA-145-3p/5p)供后续研究。2.通过茎环法实时荧光定量PCR验证miRNA-145-3p在EO-PE胎盘中的表达。转染miRNA-145-3p的模拟物和抑制剂,体外构建过表达和沉默滋养细胞模型;利用CCK-8实验、平板克隆形成实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测滋养细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化,评估miRNA-145-3p对滋养细胞生物学特性的影响;蛋白免疫印迹实验检测EMT通路关键分子蛋白表达水平变化,评估miRNA-145-3p对EMT通路的影响。3.通过茎环法实时荧光定量PCR验证miRNA-145-5p在EO-PE胎盘中的表达。转染miRNA-145-5p的模拟物和抑制剂,体外构建过表达和沉默滋养细胞模型;利用CCK-8实验、平板克隆形成实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测滋养细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化,评估miRNA-145-5p对滋养细胞生物学特性的影响;蛋白免疫印迹实验检测EMT通路关键分子蛋白表达水平变化,评估miRNA-145-5p对EMT通路的影响。4.通过细胞转录组高通量测序鉴定miRNA-145-3p和miRNA-145-5p在滋养细胞中的调控网络,筛选潜在的下游基因(HTRA1)进行后续研究。5.通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验,验证HTRA1在EO-PE胎盘中的表达。转染质粒和siRNA,构建HTRA1过表达和沉默细胞模型;利用CCK-8实验、平板克隆形成实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化,评估HTRA1对滋养细胞生物学特性的影响;蛋白免疫印迹实验检测EMT通路关键分子蛋白表达水平变化,评估HTRA1对EMT通路的影响;同时转染miRNA-145-3p和miRNA-145-5p的模拟物以及HTRA1质粒,阻断miRNA-145-3p和miRNA-145-5p对HTRA1的负调控作用,平板克隆实验检测细胞增殖能力变化,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化,评估HTRA1对于miRNA-145-3p和miRNA-145-5p对滋养细胞生物学特性调控作用的影响;蛋白免疫印迹实验检测EMT通路关键分子蛋白表达水平变化,评估HTRA1基因对于miRNA-145-3p和miRNA-145-5p对EMT通路调控作用的影响。【研究结果】1.生物信息学分析鉴定了EO-PE胎盘组织的核心miRNA,即miRNA-145-3p/5p。2.研究发现,miRNA-145-3p在EO-PE胎盘组织中表达减少,体外沉默miRNA-145-3p抑制滋养细胞增殖、迁移和侵袭能力,并抑制滋养细胞EMT转化。3.研究发现,miRNA-145-5p在EO-PE胎盘组织中表达减少,体外沉默miRNA-145-5p抑制滋养细胞增殖、迁移和侵袭能力,并抑制滋养细胞EMT转化。4.细胞转录组高通量测序在miRNA-145-3p和miRNA-145-5p过表达细胞模型中各鉴定了2180和2093个差异基因,HTRA1在两种细胞模型中均下调。5.HTRA1在EO-PE胎盘组织中上调,过表达HTRA1表达抑制滋养细胞增殖、迁移和侵袭能力,抑制滋养细胞EMT转化;miRNA-145-3p和miRNA-145-5p均可负调控HTRA1的表达,HTRA1质粒与miRNA-145-3p或miRNA-145-5p的模拟物共转染可解除miRNA-145-3p或miRNA-145-5p对HTRA1表达的抑制作用,逆转miRNA-145-3p或miRNA-145-5p对滋养细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用以及对EMT的促进作用。【研究结论】过表达miRNA-145-3p/5p可能通过负调控HTRA1的表达进而促进控滋养细胞增殖、迁移和侵袭,发挥保护作用。低表达的miRNA-145-3p/5p通过对滋养细胞生物学行为的调控,促进EO-PE的发生发展。
其他文献
目的:研发一种脊柱侧凸康复机器人,探索其合适的治疗处方和对青少年特发性脊柱侧凸(Adolescent Idiopathic Scoliosis,AIS)的治疗效果,进一步的借助机器人探索S型AIS成对横向矫正力的较优位置组合方案。方法:(1)基于目前有效脊柱侧凸康复治疗中的核心治疗理念,研发脊柱侧凸康复机器人,并采用系统可用性问卷和场景后问卷评估其可操作性,通过观察不良反应评估其安全性。(2)纳入
学位
背景和目的:腹主动脉瘤和夹层(Abdominal aortic aneurysm and dissection,AAD)是一种与炎症反应有密切联系的心血管疾病,每年在世界范围内造成大量人口死亡。然而导致腹主动脉扩张和破裂的免疫细胞亚群与信号通路至今仍不清楚。我们通过利用单细胞转录组测序技术(Single-cell RNA sequencing,sc RNA-seq)在腹主动脉瘤和夹层(AADs)的
学位
1 1-磷酸鞘氨醇受体2在胸主动脉夹层病理组织与正常对照组织中的表达差异研究目的:胸主动脉夹层(Thoracic aortic dissection,TAD)是一种严重且不可预测的临床疾病,往往导致致命的后果。近年来TAD的分子机制被广泛研究,大量证据表明TAD是一种炎症性疾病。1-磷酸鞘氨醇受体 2(Sphingosine-1-phosphate receptor 2,S1PR2)通路是包括一系
学位
第一部分:囊型肝包虫中钙化性纳米微粒的分离、培养及特征观察目的:从囊型肝包虫外囊组织中分离和培养钙化性纳米微粒并实施形态学鉴别,以证实胆漏的肝包虫钙化囊壁中存在钙化性纳米微粒,为下文的研究提供基础。方法:收集37例囊型肝包虫病例,拟从包虫的外囊壁组织中分离培养出钙化性纳米微粒,观察肝包虫胆漏与包虫外囊壁钙化的关系;电镜观察于囊壁培养出的钙化性纳米微粒的特征;检测肝包虫外囊壁中钙化相关蛋白(OPN和
学位
粮食安全是保障社会经济稳定发展的基石。四川作为农业大省和人口大省,确保粮食安全对于维护西部乃至国家粮食安全至关重要。本文在总结四川粮食安全成就的基础上,辨析新时期四川粮食安全形势及其存在的问题,并从保土地、攻单产、育劳力和强支撑这四个方面提出保障四川粮食安全的应对之策。
期刊
目的:根尖周炎是指根尖周区域的炎症性疾病,发病原因以细菌因素为主。以粪肠球菌为代表的顽固性细菌在适宜条件下形成细菌生物膜的能力和根管系统的复杂性(根管侧支、根尖分叉、根尖分歧等)等诸多因素导致现阶段的治疗手段(机械清理、药物冲洗等)无法彻底地清除细菌生物膜。本课题组前期工作已证实低温大气压等离子体(CAP)对多种细菌的杀灭作用。在前期基础上,课题组研制了一台新型等离子体射流治疗仪,拟对该机器产生的
学位
<正>近年来,四川认真贯彻习近平总书记"擦亮四川农业大省金字招牌"重要指示精神,深入实施优质粮食工程,促进了粮食产业高质量发展。2020年,全省入统粮油工业产值2119亿元、增长5.2%。一、坚持"五优联动",全环节推动粮食产业提质增效投资34亿元建设"好粮油"示范县18个、质检体系项目88个、产后服务中心353个,突出典型示范带动,有效增加优质粮油产品供给。
期刊
背景:特发性肺纤维化(Idiopathic Pulmonary Fibrosis,IPF)是一种致命的间质性肺疾病,目前其治疗方法非常有限。抗酒石酸酸性磷酸酶5(Tartrate-resistant Acid Phosphatase 5,ACP5)具有多种功能,然而它在IPF中的作用及机制仍不明确。目的:探究肺成纤维细胞、博来霉素(Bleomycin,BLM)诱导的肺纤维化小鼠肺组织、IPF患者血
学位
目的:WEE1激酶在细胞周期G2/M检查点和DNA损伤反应的调节中起重要作用,抑制WEE1可以增加细胞基因组的不稳定性,促进肿瘤细胞凋亡。ATR是哺乳动物有丝分裂检查点蛋白1的同源产物,同时也是DNA损伤检查点的主要成员。当前肿瘤治疗的热点是小分子抑制剂的协同致死,基于此,本研究拟通过联合WEE1抑制剂和ATR抑制剂探讨抗肿瘤的效应和机制。方法:利用蛋白印迹实验验证WEE1抑制剂对ATR相关通路的
学位
背景:心脏手术患者围术期常并发心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI),进而影响手术疗效和预后。心脏受交感和迷走神经的双重调控,激活交感神经可加重心肌损伤。肠-脑-心轴与自主神经的相关性日益受到重视,但交感/迷走神经对MIRI肠道菌群和脑代谢的影响尚未见报道。目的:探讨去交感/迷走神经对MIRI的效应及其对脑代谢和肠道菌群的影响。
学位