氯丙嗪(chlorpromazine，CPZ)属于吩噻嗪类抗精神分裂症药物，1952年开始用于临床，成为20世纪医学界重大发现之一，开创了精神病治疗的先河，奠定了现代精神药理学的新时代。CPZ可导致少数用药患者发生黄疸型肝损伤，服用者中黄疸型胆汁淤积的发生率为1～2％，并且与用药剂量和时间无明显的相关性，呈现典型的特异质肝损伤的特征。CPZ所致肝细胞胆汁淤积的临床表现、发病特征，与其它ILT的表现形式一样，同样具有不可预测性、发生率低、无明显的剂量反应关系、难以用实验动物模型复制等特点。因此，CPZ诱发肝细胞胆汁淤积的分子机制至今尚未完全明了。本研究首先建立CPZ致大鼠胆汁淤积模型，评价了CPZ致大鼠胆汁淤积损伤的毒性作用特点，在此基础上，应用RT-PCR技术、蛋白质组学和代谢组学相关技术从大鼠肝脏胆汁转运体基因变化、肝细胞全蛋白表达改变、肝脏萃取物和胆汁代谢表型的角度，深入探讨了CPZ胆汁淤积发生的分子作用机制。CPZ胆汁淤积大鼠模型的建立：实验使用SD大鼠，对CPZ不同剂量(37.5mg／kg、53.0mg／kg和75.0mg／kg)单次给药大鼠和相同剂量(37.5mg／kg)三次给药大鼠的血液生化指标进行个体样本分析。根据反映大鼠胆汁淤积损伤的敏感指标TBA、TBIL历史参照值和对照值的上限值，确定发生胆汁淤积的大鼠之后，将每组动物按是否发生胆汁淤积分为胆汁淤积型(CS)及非胆汁淤积型(NCS)亚组。测定大鼠胆汁中TBA、TBIL、PLIP、TCHO的浓度和输出量，采用光镜和透射电镜检查大鼠肝脏病变。结果表明37.5mg／kg CPZ组未见CS大鼠，53.0和75.0mg／kg CPZ组CS的发生率分别为16.7％和50％。37.5mg／kg CPZ三次给药大鼠，D1、D4和D7天剖杀时的CS发生率分别是37.5％、13.3％和33.3％。胆汁流速测定结果表明，与对照组大鼠比较，CS大鼠胆汁流速显著性降低，NCS大鼠流速未发生改变；胆汁中的TBA，TBIL和PLIP浓度在所有NCS大鼠中未发生变化，而CS大鼠中的TBA浓度显著性降低，TBIL浓度显著性升高，PLIP浓度未发生显著性变化。胆汁中TBA，TBIL和TCHO的输出量在NCS大鼠中未发生变化，而在CS大鼠中显著性降低，这些结果表明大鼠胆汁中的TBA也是反映大鼠胆汁淤积的一个敏感指标，大鼠胆固醇和磷脂的代谢受到影响。此外，CPZ单次给药和多次给药大鼠血清中的ALT和AST在CS和NSC大鼠中均显著性升高，但CS大鼠升高幅度更大。大鼠肝脏病理检查发现，37.5mg／kg CPZ组个别大鼠肝脏少数细胞发生轻微的嗜酸性变，53.0和75.0mg／kgCPZ组NCS大鼠肝细胞嗜酸性变，肿胀，偶发灶性坏死，CS大鼠的病理变化主要是肝细胞体积缩小，胞浆嗜酸性染色增强，胞核浓缩深染，部分细胞肿胀，细胞体积增大，胞浆疏松，偶见小血管旁嗜酸性粒细胞浸润。CS大鼠病理改变与文献报道的CPZ直接肝损伤病理特征一致。肝脏电镜结果表明37.5mg／kg CPZ组大鼠细胞核改变不明显，线粒体尚可，嵴可见，说明肝脏只发生轻度损伤。53.0mg／kg、75.0mg／kg CPZ组大鼠透射电镜结果表明CPZ主要损伤了肝细胞中的膜结构、线粒体与内质网，表明CPZ直接肝损伤较严重，75.0mg／kg CPZ组CS大鼠发现毛细胆管微绒毛异常，胆小管空腔异常，大鼠肝脏超微结构改变与CPZ胆汁淤积损伤关系更为密切。CPZ胆汁淤积大鼠胆汁转运体基因的表达：CPZ给药大鼠肝脏胆汁转运系统相关基因Ntcp、Oatp1、Oatp2、Bsep(Spgp)、Mrp1、Mrp2、Mdr2、Mdr1a、Mdr1b表达RT-PCR检测结果表明大鼠胆汁转运系统中的基因Mdr2、Mdr1a和Oatp1在CPZ给药大鼠中的表达发生明显的上调或下调，其它转运体基因表达未发生显著性变化。CPZ给药组NCS大鼠Mdr2表达上调，而CS大鼠表达下调，与对照组相比，都具有显著性差异。Mdr1a表达在CPZ给药组NCS大鼠中未发生变化，而在CS大鼠中表达下调。Oatp1表达在NCS和CS大鼠中均发生下调。磷脂、胆固醇和胆汁酸的分泌只有密切协调才能防止胆汁酸盐诱发对胆管的损伤，而三者的协调主要由Mdr2调控，Mdr2在CS和NCS大鼠中发生相反的表达改变，提示其在CPZ胆汁淤积发生中起着重要的作用。Mdr1a与CYP450是疏水化合物解毒反应中的一对对立体，Mdr1a是肝脏CYP450的主要调节因子，Mdr1a在NCS和CS中大鼠的表达差异，会导致CYP450对药物代谢的差异。Oatp1在NCS和CS大鼠中表达均下调，从而影响CPZ毒性代谢产物的肝外输出，并导致其在体内蓄积。CPZ胆汁淤积大鼠蛋白质组学研究：实验利用蛋白质组学中的二维凝胶电泳技术对对照组大鼠、37.5mg／kg CPZ组NCS大鼠和75.0mg／kg CPZ组CS大鼠的肝脏蛋白进行分离，分别分离出1277、1303和1257个蛋白点，与对照组相比，共发现19个表达差异的蛋白质点，其中质谱鉴定出9个蛋白质。6个表达减弱的蛋白分别是葡萄糖调节蛋白58、载脂蛋白A-Ⅰ、碳酸酐酶3、过氧化物还原酶Ⅰ、α-酮酸脱氢酶、儿茶酚邻位甲基转移酶，2个表达量增强的蛋白分别是β-微管蛋白和调钙素。另一方面，上述部分蛋白在37.5mg／kg CPZ组NCS大鼠中也发生表达改变，但表达方式不同。X蛋白质点，它在对照组中没有表达，在37.5mg／kg CPZ组NCS大鼠中有表达，但表达量低，在75.0mg／kg CPZ组CS大鼠中高表达。这些结果提示免疫反应和细胞钙稳态紊乱可能参与了CPZ胆汁淤积特异质反应的发生，CPZ胆汁淤积大鼠胆固醇代谢途径受损，氧化应激反应增强，抗氧化应激防御体系受损。CPZ胆汁淤积大鼠代谢组学研究：利用NMR技术检测对照组大鼠、CPZ不同剂量给药大鼠、CS大鼠和NCS大鼠肝组织萃取物和胆汁中内源性代谢产物谱的变化，结果表明对照组大鼠和37.5mg／kg CPZ大鼠与53.0mg／kg CPZ大鼠和75.0mg／kg CPZ大鼠肝脏组织和胆汁的代谢谱不同，75.0mg／kg CPZ组CS大鼠和NCS大鼠的代谢成分也可明显区分开。这些代谢成分的改变提示CPZ肝毒性导致能量代谢中的糖酵解、三羧酸循环改变，其肝毒性与线粒体、内质网功能降低、氧化磷酸化和脂肪氧化改变、肝脏抗氧化防御体系受损有关，这些结果与前期病理变化结果相一致。75.0mg／kg CPZ组CS和NCS大鼠肝组织萃取物、胆汁中代谢成分的改变发现两者即有相同的代谢成分改变，又有部分不同的代谢成分改变，这些不同的代谢成分可能是CPZ胆汁淤积特异质发生的特征代谢表型。