病毒载体因其能高效转导目的基因而被认为是最有尖用前景的载体系统.研究小组构建的整合型腺病毒载体pAdE<,1>CMVITREXneo,集腺病毒及腺病毒相关病毒的优点,克服二者的缺点,具有转导效率高,稳定整合,高效表达外源基因等特点.肿瘤的形成过程是一个涉及多步骤、多基因参与的复杂过程,一般认为癌症是由基因多位点突变引起细胞的生长失控造成的.然而最新的研究表明,端粒酶激知在细胞癌变过程中发挥重要作用.端粒酶是由RNA和蛋白质组成的核蛋白,它可以自身RNA为模板逆转录合成端区重复序列,从而解决真核生物DNA复制过程中的"末端复制问题".为了进一步探讨端粒酶在肿瘤形成中的作用,研究小组将端粒酶RNA(hTR)的全长cDNA反向重组至整合型腺病毒载体pAdE<,1>CMVITREXneo上,感染端粒酶活性较高的乳腺癌细胞MCF-7,显著抑制了MCF-7细胞的端粒酶活性,使细胞端区长度缩短;随后观察了vAdT-AAV感染前后,MCF-7细胞对EGF刺激的反应性的变化,观察了相关基因表达的变化.1、该文构建的端粒酶反义重组病毒vAdT-AAV,感染人乳腺癌细胞系MCF-7后,能够将hTR cDNA整合至细胞基因组,稳定持久地表达hTR反义RNA,证明了重组病毒载体pAdE<,1>CMVITREXneo c的整合功能.2、hTR反义cDNA的导入,显著抑制了乳腺癌细胞端粒酶活性,使细胞端区长度缩短,增殖速度下降,软琼脂集落形成能力和裸鼠致瘤能力降低.表明hTR反义cDNA的导入,在降低端粒酶活性、抑制肿瘤细胞增殖速度的同时,也降低了肿瘤细胞的恶性度,部分逆转了其恶性表型.3、对端粒酶活性水平存在明显差别的各组乳腺癌细胞结予EGF刺激,用MTT法检测细胞增殖,观察到端粒酶活性的降低显著抑制了EGF的促细胞增殖效应.4、hTR反义cDNA导入乳腺癌细胞后,p21基因表达增强,表明端粒酶活性 的降低,可以激活或促进p21基因的转录,提示细胞恶性增殖能力的降低及EG F促细胞增殖效应的减弱可能与p21基因表达增强有关.